轉(zhuǎn)化生長因子β1對犬穿透性角膜移植后免疫排斥的影響.pdf

1、目的:
　　 通過探究TGF-β1在犬穿透性角膜移植術(shù)(PKP)后在角膜中的表達變化規(guī)律并運用TGF-β1蛋白滴眼液點眼，來探索TGF-β1對角膜免疫排斥反應的影響。
　　 方法:
　　 (1)選取22只本地雜交犬隨機分為2組，分別為生理鹽水點眼組和供體組，每組9只，余下3只備用。PKP術(shù)后試驗犬每日生理鹽水點眼4次，每次點2滴。每日裂隙燈觀察，根據(jù)Larkin評分標準記錄免疫排斥反應發(fā)生時間。
　　 (

2、2)選取35只本地雜交犬隨機分為2組，分別為生理鹽水點眼組，供體組，每組15只，余下5只備用。在生理鹽水點眼組試驗犬PKP術(shù)后1d，3d，7d和14d使用RT-PCR方法測量角膜中TGF-β1的表達量變化。
　　 (3)選取59只本地雜交犬隨機分為3組，分別為TGF-β1點眼組，生理鹽水點眼組，供體組，每組18只，余下5只備用。TGF-β1點眼組于PKP術(shù)后每日點4次TGF-β1蛋白濃度為50ρ1/ml的滴眼液，每日3次，生理鹽

3、水組以相同點眼方式點眼生理鹽水，根據(jù)Larkin評分標準記錄免疫排斥反應發(fā)生時間，并于術(shù)后3d，7d和14d，取角膜組織制作HE染色切片。
　　 試驗結(jié)果:
　　 (1)生理鹽水試驗組在角膜移植術(shù)后的第5d發(fā)生2例排斥反應，術(shù)后第6d發(fā)生3例排斥反應，術(shù)后第7d發(fā)生3例排斥反應，術(shù)后8d發(fā)生1例排斥反應，角膜植片免疫排斥反應的平均時間為6.7±1.3天。
　　 (2)RT-PCR得到的數(shù)據(jù)處理采用相對定量的△△C

4、t法，根據(jù)各個基因的標準曲線，通過測試樣的CT值得到相對應的數(shù)據(jù)，以此比較。TGF-β1表達量在術(shù)后1d為2.4倍，術(shù)后3d為2.9倍，此時的表達量為整個檢測時間點中的最高峰值。TGF-β1表達量在術(shù)后3d以后呈現(xiàn)遞減的趨勢，術(shù)后7d為0.75倍，直到術(shù)后14d為最低值0.5倍。
　　 (3)在TGF-β1液滴定術(shù)眼試驗中，用生理鹽水滴眼的對照組，在角膜移植術(shù)后的5d發(fā)生兩例排斥反應，術(shù)后6d發(fā)生4例排斥反應，術(shù)后7d發(fā)生5例排

5、斥反應，術(shù)后8d發(fā)生3例排斥反應，最后兩例于術(shù)后第9d發(fā)生。使用TGF-β1蛋白滴眼液的實驗組于角膜移植術(shù)后11d發(fā)生第一例排斥反應，術(shù)后12d發(fā)生一例排斥反應，術(shù)后13d發(fā)生3例排斥反應，術(shù)后14d發(fā)生5例排斥反應，術(shù)后15d發(fā)生3例排斥反應，術(shù)后17d發(fā)生一例排斥反應，最后一例排斥反應發(fā)生于術(shù)后19d。TGF-β1蛋白滴眼液點眼的試驗組的角膜植片存活的平均時間為13±2.1d，使用生理鹽水點眼的對照組的角膜移植片存活平均時間為7±1

6、.3d，試驗組角膜植片的存活時間很顯著的長于對照組，差異顯著(P＜0.01)。
　　 (4)使用裂隙燈對穿透性角膜移植術(shù)后的植片進行臨床觀察并拍照記錄，PKP術(shù)后3d觀察角膜植片，生理鹽水對照組的植片出現(xiàn)輕度的角膜水腫，裂隙燈光能透射前房，TGF-β1蛋白滴眼液點眼試驗組的植片均呈現(xiàn)比較好的透明度，植片周圍的植床呈現(xiàn)輕度的角膜水腫，裂隙燈光能透射前房。兩組均未發(fā)生免疫排斥反應。PKP術(shù)后7d觀察角膜植片，生理鹽水對照組的植片有1

7、1例已經(jīng)完全失去透明度，角膜嚴重增厚，植片周圍有新生血管爬行。TGF-β1蛋白滴眼液試驗組的角膜植片呈現(xiàn)中度水腫，裂隙燈光部分能透射前房，縫合處有少量新生血管爬行，試驗組尚未發(fā)現(xiàn)免疫排斥反應的發(fā)生。PKP術(shù)后14d，生理鹽水對照組所有植片重度水腫，植片完全失去透明度。TGF-β1蛋白滴眼液試驗組的植片有10例發(fā)生免疫排斥反應，裂隙燈光無法穿透前房，瞳孔尚可見，角膜重度水腫。生理鹽水對照組術(shù)后3d的組織切片觀察可見，內(nèi)皮層有部分缺失，基質(zhì)

8、膠原細胞排列有序，基質(zhì)層輕度水腫，上皮層略有損傷。術(shù)后7d的組織切片觀察可見，內(nèi)皮層脫落，基質(zhì)層中度水腫，上皮層部分缺失或脫離基質(zhì)層。術(shù)后14d的組織切片觀察可見，內(nèi)皮層完全脫落，后彈力層部分缺失，上皮層部分缺失，基質(zhì)層嚴重水腫;TGF-β1試驗組術(shù)后3d的組織切片觀察可見，角膜上皮細胞完成，排列有序，基質(zhì)層無明顯水腫，內(nèi)皮細胞完整。術(shù)后7d，內(nèi)皮細胞仍然附著于后彈力層但內(nèi)皮細胞數(shù)量減少，上皮層完成，上皮細胞排列有序。術(shù)后14d，內(nèi)皮細