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文檔簡介
1、目的:百草枯(paraquat,PQ):是我國農(nóng)村廣泛使用一種除草劑,對人毒性極大,因無特效解毒藥,故死亡率很高。目前世界上已有許多國家已禁止使用百草枯。百草枯中毒后損傷的主要臟器是肺,早期可導(dǎo)致急性肺損傷,晚期可致肺纖維化,患者最終出現(xiàn)呼吸衰竭。百草枯中毒所致急性肺損傷的發(fā)病機(jī)制還不清楚,一般認(rèn)為百草枯中毒后在體內(nèi)形成過多陽離子、超氧陰離子及羥自由基,誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化反應(yīng),直接損害肺泡細(xì)胞,使肺泡上皮細(xì)胞分泌、合成肺泡表面活性物質(zhì)減少有
2、關(guān)。目前百草枯中毒的治療方法主要包括洗胃、清除毒物、清除氧自由基、使用免疫抑制劑及激素,行血液透析、血液灌流。
鹽酸氨溴索是一種廣泛應(yīng)用治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物,具有祛痰功能。近年發(fā)現(xiàn)鹽酸氨溴索還有抗炎和促進(jìn)肺泡Ⅱ型細(xì)胞分泌,合成肺泡表面相關(guān)活性物質(zhì)作用。SP-D是肺泡Ⅱ型細(xì)胞合成、分泌肺泡表面相關(guān)活性物質(zhì)蛋白,人們發(fā)現(xiàn)SP-D在急性肺損傷中起著極重要作用。
我們設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)用來觀察鹽酸氨溴索對大鼠百草枯中毒急性肺損傷S
3、P-D及各相關(guān)指標(biāo)的影響,并評價(jià)鹽酸氨溴索對百草枯中毒治療作用。
方法:將120只體重在200-250g之間的雄性大鼠,隨機(jī)分為三個實(shí)驗(yàn)組:(1)生理鹽水組(NS組,n=24)腹腔每日注入等容量0.9%生理鹽水。(2)百草枯中毒組(PQ組,n=48):以30mg/kg腹腔注入0.5%百草枯稀釋液。(3)鹽酸氨溴索治療組(AT組,n=48):百草枯染毒后每日腹腔注入鹽酸氨溴索液,按40mg/kg注入。PQ組與AT組再分別按時間點(diǎn)
4、隨機(jī)分為四組,分別為1d,3d,5d,7d實(shí)驗(yàn)組,每組均為12只。NS組也按1d,3d,5d,7d四個時間點(diǎn)隨機(jī)分為四組,各時間點(diǎn)均為6只。抽取股靜脈血用來檢測WBC和PMN百分比。抽取股動脈血測定動脈血氧分壓(PaO2)。取大鼠的左肺行眥染色和免疫組化,用于觀察肺組織形態(tài)學(xué)變化和SP-D在肺組織表達(dá)。右肺用western blot法檢測肺組織中SP-D的含量。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,采用單因素方差分析進(jìn)行組間比較,并運(yùn)用
5、均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差對數(shù)據(jù)進(jìn)行描述。以P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:
1大鼠注射百草枯后及鹽酸氨溴索治療后表現(xiàn)大鼠注射百草枯后,食欲減退,呼吸急促,行動遲緩,反應(yīng)遲鈍,部分大鼠口、鼻有少量粘液性分泌物。百草枯中毒大鼠經(jīng)鹽酸氨溴索治療后,癥狀減輕。NS組大鼠無異常表現(xiàn)。
2靜脈血液WBC計(jì)數(shù)和PMN百分比變化
2.1靜脈血液中WBC計(jì)數(shù)的變化
NS組靜脈血液WBC計(jì)數(shù)各時間點(diǎn)均無明顯差異(
6、P>0.05)。PQ組各相應(yīng)時間點(diǎn)均顯著高于NS組(P<0.01)。AT組WBC計(jì)數(shù)也增高,經(jīng)鹽酸氨溴索治療后下降。但各個相應(yīng)時間點(diǎn)仍高于NS組(P<0.01),第一天AT組與PQ組無明顯差異(P>0.05),第3、5、7天WBC計(jì)數(shù)均低于PQ組(P<0.01)。
2.2靜脈血液中PMN百分比的變化
NS組PMN百分比各個時間點(diǎn)無明顯差異(P>0.05)。PQ組PMN百分比第一天即開始升高,各個相應(yīng)時間點(diǎn)與NS組相比
7、均明顯增高(P<0.01)。AT組第一天于PQ組無明顯差異(P>0.05)。第5、7天明顯下降(P<0.01)。但仍明顯高于NS組各時間點(diǎn)(P<0.01)。
2.3動脈血液中PaO2的變化
NS組動脈血液中PaO2各個時間點(diǎn)無明顯差異(P>0.05)。PQ組動脈血液中PaO2逐漸下降,各相應(yīng)時間點(diǎn)均明顯低于NS組(P<0.01)。AT組PaO2各相應(yīng)時間點(diǎn)均低于NS組(P<0.01)。與PQ組相比:第1天兩者無明顯差
8、異(P>0.05),第3、5、7天AT組PaO2開始增高,兩者相比有顯著差異(P<0.01)。
3肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察
3.1肺的大體標(biāo)本觀察
NS組肺標(biāo)本色澤、大小形態(tài)正常,質(zhì)地柔軟,表面光滑,無出血及炎性滲出物,無充血水腫,切面無滲出物。PQ組肺標(biāo)本呈暗紅色,體積增大,質(zhì)地韌,肺組織表面腫脹充血,部分肺葉可見點(diǎn)狀出血,肺組織切面有淺紅色液體滲出。AT組肺標(biāo)本較百草枯中毒組顏色淡,充血水腫輕,部分肺葉可見
9、點(diǎn)片狀出血,切面有少許滲液。
3.2 HE染色光鏡觀察
NS組可見肺泡結(jié)構(gòu)完整,排列整齊,分布均勻,肺泡腔內(nèi)無炎性細(xì)胞侵潤。PQ組可見肺泡和肺間質(zhì)充血水腫,肺泡間隔增厚并有中性粒細(xì)胞侵潤,肺泡腔內(nèi)粉紅色滲液。嚴(yán)重時可見肺泡和肺間質(zhì)充血水腫明顯,部分肺泡萎陷,纖維母細(xì)胞增生,肺泡腔有大量血性滲液。AT組與PQ相比,肺泡和肺間質(zhì)充血水腫均較輕。
4免疫組織化學(xué)染色和western blot方法結(jié)果
4
10、.1免疫組化觀察肺組織中SP-D的表達(dá)
4.1.1光鏡下觀察SP-D在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中的表達(dá)。NS組可見細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中SP-D顆粒,PQ組SP-D在肺組織表達(dá)明顯減弱。AT組在肺組織表達(dá)較PQ組增強(qiáng)。
4.1.2 NS組SP-D陽性細(xì)胞數(shù)各時間點(diǎn)無明顯差異(P>0.05)。PQ組與NS組各相應(yīng)時間點(diǎn)相比,陽性細(xì)胞數(shù)明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。AT組SP-D陽性細(xì)胞數(shù)各相應(yīng)時間點(diǎn)均低于NS組有明顯差異(P
11、<0.01);與PQ組相比,第1天,兩者無明顯差異(P>0.05),第3、5、7天AT組SP-D陽性細(xì)胞數(shù)各相應(yīng)時間點(diǎn)較PQ組均增高,兩者有顯著差異(P<0.01)。
4.2 western blot法檢測SP-D在肺組織表達(dá)
NS組肺組織SP-D含量在各時間點(diǎn)無明顯變化。PQ組肺組織SP-D含量與NS組相比,各時間點(diǎn)SP-D含量均明顯下降,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。AT組肺組織SP-D含量第1、3天較PQ組相比
12、無顯著差異(P>0.05),經(jīng)鹽酸氨溴索治療后,第5、7天兩者有明顯差異(P<0.01)。AT組較NS組有較大差異(P<0.01)。
結(jié)論:
1大鼠百草枯中毒后,靜脈血WBC計(jì)數(shù)、多形核PMN百分比均明顯增高,PaO2持續(xù)下降,說明百草枯中毒誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)引起急性肺損傷主要因素之一。
2通過免疫組化和Western blot法,發(fā)現(xiàn)百草枯中毒后SP-D在肺組織表達(dá)減弱,肺組織SP-D含量也明顯降低,說明百草枯
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