內(nèi)皮化小口徑人工血管的實驗研究.pdf

1、小口徑動脈(直徑＜6毫米)阻塞性疾病是嚴重威脅身體健康的疾病,隨著人口老齡化進一步加劇,該類病發(fā)病率在逐年提高。主要分為如下幾類:(1)冠狀動脈阻塞;(2)下肢動脈閉塞,多由動脈硬化、血栓閉塞性脈管炎和糖尿病等引起。治療膝下動脈閉塞癥最常用的血管移植材料是自體大隱靜脈,冠脈搭橋術(shù)也首選自體動靜脈。但對有些患者來說,自體可移植的血管已經(jīng)使用或發(fā)生病理性改變,只能選用小口徑人工血管替代。由于小口徑人工血管移植后其血液流速慢,難以形成完整的內(nèi)

2、皮細胞覆蓋及內(nèi)膜過度增生,導(dǎo)致通暢率低下。將自體血管內(nèi)皮細胞經(jīng)體外擴增培養(yǎng)后,種植于人工血管內(nèi)表面,培養(yǎng)后可以成為有功能的內(nèi)皮細胞單層,能提高移植后的遠期通暢率。
　　 本實驗通過酶消化法獲取成人大隱靜脈內(nèi)皮細胞,并進行體外大規(guī)模培養(yǎng)擴增,為人工血管內(nèi)皮化技術(shù)提供高純度的種子細胞;然后將擴增培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞鋪植于纖維蛋白膠預(yù)襯的ePTFE人工血管內(nèi),繼續(xù)體外培養(yǎng)9-12d,于不同時間點在熒光顯微鏡和掃描電鏡下觀察細胞的生長活力和密

3、度,來探討以成人自體大隱靜脈內(nèi)皮細胞為種子細胞構(gòu)建內(nèi)皮化人工血管的可行性。
　　 目的
　　 建立成人大隱靜脈內(nèi)皮細胞體外大規(guī)模培養(yǎng)擴增的方法,并對其功能進行檢測。
　　 方法
　　 隨機選擇11例大隱靜脈曲張行靜脈剝離術(shù)的患者,剝離近端4-6cm長的靜脈段,采用酶消化法,進行內(nèi)皮細胞的獲取,獲得的細胞用M199培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代,并應(yīng)用細胞免疫化學(xué)方法和透射電鏡對細胞進行鑒定。同時用試劑盒檢測原代和傳代細胞

4、vonWillebrand因子(vWF)的含量。
　　 結(jié)果
　　 酶消化法可以獲得高純度的內(nèi)皮細胞,電鏡下可以看到內(nèi)皮細胞特征性的“W-P”小體,免疫組化方法顯示Ⅷ因子和CD31染色陽性。原代和傳代細胞培養(yǎng)上清液中vWF因子含量無明顯不同(P＞0.05)。
　　 結(jié)論
　　 酶消化法可以獲得高純度的內(nèi)皮細胞,經(jīng)擴增后能為人工血管內(nèi)皮化技術(shù)提供足量的種子細胞。
　　 目的
　　 探討成人大

5、隱靜脈內(nèi)皮細胞種植到人工血管內(nèi)表面的可行性,并對內(nèi)皮細胞功能進行檢測。
　　 方法
　　 將成人大隱靜脈內(nèi)皮細胞在體外擴增培養(yǎng)13-15d,將擴增培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞鋪植于纖維蛋白膠預(yù)襯的ePTFE人工血管內(nèi)表面,繼續(xù)體外培養(yǎng)9-12d。在不同的時間點,分別剪取部分內(nèi)皮化的人工血管,行免疫組化和掃描電鏡檢查。
　　 結(jié)果
　　 平均孵育12d后,人工血管腔面見一層均勻的基質(zhì),其表面有內(nèi)皮細胞單層,內(nèi)皮細胞排列緊