多環(huán)芳烴降解菌的遺傳改造及石油污染土壤的微生物部分修復(fù).pdf

1、隨著工業(yè)的發(fā)展，石油等化石燃料的消耗不斷增加，以此同時(shí)給環(huán)境帶來(lái)的污染越發(fā)嚴(yán)重，多環(huán)芳烴作為主要的污染物之一對(duì)生物的毒性最大。除去環(huán)境中的多環(huán)芳烴最好的方法就是微生物降解。本研究從實(shí)驗(yàn)室保存的一株能高效降解多環(huán)芳烴的多食鞘氨醇桿菌SWH-2中克隆出環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因，并進(jìn)行測(cè)序。將獲得的基因通過(guò)基因工程技術(shù)轉(zhuǎn)化到SWH-2的染色體DNA中，完成對(duì)SWH-2的遺傳改造，得到一株新菌株SWH-21。降解實(shí)驗(yàn)表明SWH-21對(duì)多

2、環(huán)芳烴的降解能力高于SWH-2。本實(shí)驗(yàn)還研究了SWH-21對(duì)石油污染土壤的修復(fù)情況。本課題主要研究成果如下:
　　 1.根據(jù)GeneBank上已有的環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因序列，設(shè)計(jì)了一對(duì)簡(jiǎn)并引物。根據(jù)該引物的Tm值和GC含量，選擇合適的PCR條件進(jìn)行PCR，成功擴(kuò)增出環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因，并將該基因成功連接到pMD-18載體上，完成轉(zhuǎn)化。
　　 2.將環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因與自殺性質(zhì)粒pu

3、t-km1連接，成功構(gòu)建出重組自殺性質(zhì)粒，并成功轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α—λpir。
　　 3.通過(guò)三親雜交技術(shù)成功將環(huán)羥基化雙加氧酶大亞基的編碼基因整合到SWH-2菌的基因組中，完成了SWH-2菌的基因改造，得到了基因工程菌株SWH-21。分析對(duì)比了SWH-21菌與SWH-2菌對(duì)菲及石油的降解能力。其中SWH-21菌10天對(duì)菲的降解率高達(dá)64.32％，比SWH-2菌高出22.86％。
　　 4.將SWH-21菌與SWH-