高糖對(duì)大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞中鈣庫操控的鈣離子通道的作用研究.pdf

1、目的：
　　探索高糖對(duì)大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞（bladder smooth muscle cells，BSMCs）中鈣庫操控的鈣離子通道（store-operated calcium channel，SOCC）的影響。通過高糖處理BSMCs，模擬糖尿病膀胱（diabetes cystopathy，DCP）體外環(huán)境，探究BSMCs中SOCC的相關(guān)變化，為 DCP的病因?qū)W及其治療提供新的思路。
　　方法：
　　使用Ⅱ型膠原酶分

2、離S-D大鼠BSMCs，并用α-SMA進(jìn)行免疫熒光鑒定。分離的原代BSMCs進(jìn)行培養(yǎng)傳代。將傳至第3-5代的BSMCs同步化后根據(jù)培養(yǎng)基成分及濃度分為：正常葡萄糖濃度組（葡萄糖5.5mmol/L，NG組)，甘露醇高滲組（葡萄糖5.5mmol/L+甘露醇19.5mmol/L，OC組)，高葡萄糖濃度組（葡萄糖25mmol/L， HG組)三組，于37℃、5％CO2的孵箱中培養(yǎng)2.5天。各組BSMCs負(fù)載Fluo-4AM，通過激光共聚焦顯微鏡觀

3、察記錄三組BSMCs激活（CPA，10umol/L）和抑制SOCC（SKF-96365，10umol/L）后細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度值，計(jì)算其熒光強(qiáng)度值（F1）與背景熒光強(qiáng)度值（F0）的比值（F1/F0）來比較各組間鈣離子濃度的變化。通過RT-qPCR法和Western blot法檢測(cè)三組BSMCs中SOCC相關(guān)蛋白STIM1和Orai1的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　經(jīng)過α-SMA免疫熒光鑒定證實(shí)成功分離培養(yǎng)出膀胱平滑肌細(xì)胞。HG組加

4、入SOCC激動(dòng)劑CPA后較NG組、OC組鈣離子濃度的顯著增加（2.105±0.105， P<0.05），加入SOCC抑制劑SKF-96365后較NG組、OC組鈣離子濃度的顯著降低（1.610±0.109，P<0.05），NG組與OC組之間無明顯差異（P>0.05）；HG組BSMCs中STIM1和Orai1的mRNA表達(dá)水平以及蛋白表達(dá)水平明顯高于NG組、OC組（P<0.05），NG組與OC組之間無明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)

5、論：
　　經(jīng)過2.5天高糖作用下能激活大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞的SOCC，可能參與組成細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流部分，從而參與相應(yīng)的病理生理機(jī)制。另外，在高糖作用下，BSMCs中SOCC組成分子STIM1和Orai1表達(dá)水平發(fā)生改變可能為DCP的病理機(jī)制提供體外實(shí)驗(yàn)依據(jù)，從而為DCP病因?qū)W研究提供新的思路。但高糖對(duì)SOCC的作用機(jī)制尚不清楚，仍需后續(xù)研究。
　　本課題為國家自然科學(xué)基金“肌肉特異性微小RNA聯(lián)合成肌調(diào)節(jié)因子MyoD逆轉(zhuǎn)糖尿病