CALR基因突變與骨髓增殖性腫瘤臨床特征相關(guān)性的研究.pdf

1、相對于其他血液系統(tǒng)惡性腫瘤來說，骨髓增殖性腫瘤(myeloproliferativeneoplasm，MPN)領(lǐng)域的研究進展并不那么顯著，近2年隨著第2代測序技術(shù)在臨床的推廣應(yīng)用，大量MPN和MDS/MPN疾病相關(guān)基因被發(fā)現(xiàn)，MPN最常見的基因改變是JAK2 V617F突變，見于95％的PV患者，50％～60％的ET或PMF患者。JAK2第12外顯子突變及血小板生成素受體(MPL)基因突變見于另外5％～10％的患者。然而對于約40％的J

2、AK2和MPL野生型的ET或PMF患者來說，目前缺乏特異性的分子標(biāo)志物。
　　近期國外研究表明，野生型JAK2和MPL的PMF患者中，編碼鈣網(wǎng)蛋白的CALR基因具有重現(xiàn)性的插入和缺失。隨后研究者篩查了1107例MPN患者CALR基因第9外顯子的插入和（或）缺失突變，PV患者未檢測到突變，CALR突變均發(fā)生于野生型JAK2和MPL的ET(67％)和PMF(88％)患者中。此外，研究者在254例原發(fā)性急性髓性白血病(AML)、45例慢

3、性髓性白血病(CML)、73例骨髓增生異常綜合征(MDS)和64例慢性粒單核細胞白血病中均未檢測到CALR第9外顯子基因突變。
　　鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin，CALR)是一種普遍存在的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+結(jié)合伴侶蛋白，是未折疊蛋白反應(yīng)的關(guān)鍵分子，具有調(diào)節(jié)鈣平衡、協(xié)助蛋白質(zhì)的折疊，參與細胞分化與凋亡等多種生物學(xué)功能。人類CALR基因位于第19號染色體，由9個外顯子和8個內(nèi)含子構(gòu)成。CALR屬于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)駐留信號肽蛋白家族，由3個特殊

4、的功能區(qū)組成:高度保守的N區(qū)(1～180氨基酸)、酸性的C區(qū)(291～400氨基酸)和富含脯氨酸的P區(qū)(181～290氨基酸)。N區(qū)是CALR與Zn2+結(jié)合的區(qū)域。在體外這個區(qū)域還可以和其他內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶、細胞核受體的DNA結(jié)合域和核酸相互作用。N區(qū)的另一個重要功能是與P區(qū)一起維持其分子伴侶的功能。P區(qū)富含脯氨酸，是高親和力、低容量的鈣結(jié)合位點。C區(qū)末端帶有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)駐留信號序列KDEL，呈強酸性，具有很強的Ca2+結(jié)合能力，參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(e

5、ndoplasmicreticulum，ER)中Ca2+的存儲。近年來研究表明，CALR在多種腫瘤中特異性表達，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、診斷、預(yù)后判斷以及治療密切相關(guān)。
　　目的：
　　本文旨在從骨髓增殖性腫瘤骨髓涂片細胞學(xué)、骨髓活檢病理學(xué)、免疫表型、細胞遺傳學(xué)和臨床特征方面研究該基因突變在骨髓增殖性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中是否起到一定作用，并探討其可能的作用機理。
　　材料與方法:
　　應(yīng)用PCR及2代測序技術(shù)對596例

6、MPN患者骨髓進行基因突變檢測。運用骨髓穿刺細胞涂片、骨髓穿刺活檢組織切片、流式細胞術(shù)、骨髓細胞染色體分析等方法分析野生型與突變型其細胞學(xué)、免疫表型、細胞遺傳學(xué)等實驗室檢查以及臨床特征是否具有差異性。
　　結(jié)果：
　　1、596例MPN患者CML(132例)、PV（82例）、ET（111例）、PMF(203例)、CNL（23例）和CEL（45例），CALR基因突變檢出率分別為0、0、11.7％（13例）、24.6％（50例）