非小細(xì)胞肺癌臨床病理與GNAS1基因多態(tài)性和EGFR基因突變的相關(guān)性分析.pdf

1、背景與目的：
　　肺癌發(fā)病快、轉(zhuǎn)移率高，是全世界惡性腫瘤患者最常見(jiàn)的死亡原因。據(jù)最新世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)顯示，肺癌的死亡率位居惡性腫瘤之首。近年來(lái)，由于環(huán)境等多重因素，女性肺癌的發(fā)病率也呈連年上升趨勢(shì)。肺癌已經(jīng)成為首位人類疾病殺手，造成了沉重的社會(huì)負(fù)擔(dān)。因此，攻克癌癥病因、找到解決方法成為人類的首要任務(wù)。普遍認(rèn)為肺癌的發(fā)生、發(fā)展涉及到很多病理生理反應(yīng)，是多因素、多機(jī)制參與的惡性腫痛。據(jù)流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，肺癌的發(fā)病因素主要與個(gè)人生活習(xí)慣

2、、周圍環(huán)境、藥物使用情況以及個(gè)體遺傳因素密切相關(guān)，但是到目前為止肺癌發(fā)病的確切機(jī)制依然不完全明了。由于肺部腫瘤中將近85％的是非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)，所以研究非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制將對(duì)肺癌的防治產(chǎn)生重大的影響。隨著生物醫(yī)學(xué)研究跨入分子時(shí)代，臨床腫瘤的治療也與時(shí)俱進(jìn)的進(jìn)入到了分子學(xué)時(shí)代。人類對(duì)于疾病的病因、發(fā)病機(jī)制、預(yù)后的研究和認(rèn)識(shí)，也從傳統(tǒng)概念深入到分子生物層面。目前，以抑癌

3、基因、癌基因及相關(guān)基因研究為主的腫瘤分子研究成為熱點(diǎn)領(lǐng)域，一些生物標(biāo)記分子已經(jīng)進(jìn)入臨床應(yīng)用。
　　單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）是一種最常見(jiàn)的人類可遺傳變異，是基因組內(nèi)特定單個(gè)核苷酸位置上堿基發(fā)生改變而造成堿基序列的改變，從而引起基因組DNA序列的多態(tài)性。SNPs與疾病的遺傳易感性、藥物敏感性治療及患者預(yù)后生存率的關(guān)系已由大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)。
　　鳥(niǎo)苷酸調(diào)節(jié)蛋白基因(gu

4、anine nucleotide-binding protein，α-stimulatingactivity polypeptide1，GNAS1)是編碼鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白(GTP-binding protein， G蛋白)的基因，該基因位于染色體20q13.2-13.3，包含13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子，是一個(gè)復(fù)雜位點(diǎn)編碼多種重疊轉(zhuǎn)錄本。鳥(niǎo)苷酸調(diào)節(jié)蛋白形式多樣，其介導(dǎo)的信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中細(xì)胞的瞬時(shí)反應(yīng)和基因長(zhǎng)久調(diào)節(jié)起重要作用，是

5、一種重要的信號(hào)分子，近年來(lái)研究進(jìn)展迅速。多項(xiàng)研究表明，GNAS1基因第五外顯子T393C的SNPs與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、藥物敏感性治療及預(yù)后有關(guān)。
　　表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)在人類的細(xì)胞膜上廣泛分布，是一種蛋白酪氨酸激酶受體。EGFR與配體結(jié)合后，形成同源或異源二聚體，激活酪氨酸激酶，啟動(dòng)下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖和分化。目前研究發(fā)現(xiàn)，EGFR

6、基因突變與惡性腫瘤患者的臨床病理學(xué)特征、藥物敏感性及預(yù)后有關(guān)。
　　近年來(lái)關(guān)于鳥(niǎo)苷酸調(diào)節(jié)蛋白基因家族SNPs與多種腫瘤之間關(guān)系的研究增多，特別是關(guān)于GNAS1基因T393C與腫瘤臨床病理學(xué)特征、疾病的易感性和預(yù)后之間的關(guān)系。因此，在該實(shí)驗(yàn)中對(duì)57例非小細(xì)胞肺癌患者樣本DNA中的GNAS1基因T393C單核苷酸多態(tài)性的基因型進(jìn)行檢測(cè);同時(shí)檢測(cè)DNA中的EGFR第18-21外顯子基因突變情況，從而探討GNAS1基因T393C單核苷酸多

7、態(tài)性、 EGFR基因突變率與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展及臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系，旨在為非小細(xì)胞肺癌的基因診斷和治療提供新的理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　1.收集2012年12月至2013年3月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后病理蠟塊組織共57例。
　　2.采用離心柱法提取57例非小細(xì)胞肺癌患者的蠟塊組織中基因組DNA。
　　3.采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度(polymerase chainreac

8、tion-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)對(duì)57例樣本DNA中的GNAS1基因T393C單核苷酸多態(tài)性基因型進(jìn)行檢測(cè)。
　　4.用擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)（amplification refractory mutation system，ARMS）對(duì)57例樣本DNA中的EGFR第18-21外顯子基因突變進(jìn)行檢測(cè)。
　　5.結(jié)果分析:對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄整理，用SPSS

9、17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所以數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較，有序分類資料采用秩和檢驗(yàn)，無(wú)序分類資料采用x2檢驗(yàn);二分類樣本用Wilcoxon檢驗(yàn)，對(duì)于多分類資料，整體用Kruskal-wallis檢驗(yàn)，但是要用Bonferroni法來(lái)進(jìn)行資料中的兩兩比較;使用Logistic回歸模型估算優(yōu)勢(shì)比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(95％confidence interval，95％ CI)，同時(shí)相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度也以O(shè)R值及95％ CI來(lái)代表;檢

10、驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.GNAS1基因T393C單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)基因型T/T，T/C和C/C基因型頻率分別為38.60％(22/57)，49.12％(28/57)，和12.28％(7/57);T等位基因和C等位基因的頻率分別為63.16％和36.84％。
　　2.GNAS1基因T393C位點(diǎn)基因型分布頻率與非小細(xì)胞肺癌患者的一般情況（性別、年齡及吸煙史）、原發(fā)灶大小、TNM分期、分化程度及病理組織學(xué)分

11、型無(wú)關(guān)(P＞0.05）;基因型分布頻率與淋巴結(jié)是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。等位基因T、C分布頻率與非小細(xì)胞肺癌患者的一般情況、原發(fā)灶大小、TNM分期、分化程度以及組織學(xué)分型無(wú)關(guān)(P＞0.05)，等位基因分布頻率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。
　　3.攜帶T/C、C/C基因型使非小細(xì)胞肺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加（基因型C/C、T/C與T/T比較，OR值分別為8.500、6.120;用Bonferroni法對(duì)基因型兩兩比較

12、后結(jié)果顯示:基因型T/T與T/C比較，P＜0.05;基因型T/T與C/C比較，P＜0.05; T/C與C/C比較，P＞0.05。攜帶C等位基因使非小細(xì)胞肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)增加（等位基因T與C比較，OR值=3.143; P＜0.05）。
　　4.57例非小細(xì)胞肺癌患者中EGFR突變頻率是61.54％(35/57)，在發(fā)生突變的基因中，15例為外顯子21發(fā)生突變，為L(zhǎng)858R突變，另外20例為外顯子19發(fā)生的del缺失突變。

13、r>　　5.EGFR基因突變與非小細(xì)胞肺癌患者的年齡、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P＞0.05)。
　　6.女性非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因的突變率71.43％(25/35)高于男性患者45.57％(10/22);腺癌的突變率67.74％(21/31)高于非腺癌53.85％(14/26);吸煙患者EGFR基因的突變率72.73％(16/22)高于非吸煙患者54.29％(19/35);腫瘤體積較小(＜3cm)、分化程度較好的非小細(xì)胞