骨橋蛋白與子宮內(nèi)膜癌細胞侵襲、轉移的相關性研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma，EC）是最常見的一種影響女性生殖的惡性疾病且發(fā)病率逐年升高。近年來，隨著經(jīng)濟的發(fā)展、人們的飲食水平和生活方式的變化、非正規(guī)的激素替代治療及濫用性激素等眾多因素，導致子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率呈明顯上升趨勢并且患病人群多為年輕人，成為嚴重威脅我國女性生殖健康的惡性腫瘤。
　　骨橋蛋白(osteopo ntin，OPN)是一種具有多種生物學功能的鈣結合磷酸化糖蛋白，廣泛存在于人體的各個組

2、織及體液中，與腫瘤細胞的生長增殖和侵襲轉移密切相關，被認為是一種新的腫瘤標志物。研究結果表明近年來骨橋蛋白在婦科腫瘤中的功能和作用受到越來越多的重視。
　　目的:本文選用人子宮內(nèi)膜癌細胞（HEC-1A細胞），采用CCK-8實驗、細胞劃痕實驗、Transwell小室實驗，檢測人重組骨橋蛋白(rhOPN)對HEC-1A細胞增殖能力、侵襲能力和遷移能力的影響。分析rhOPN對HEC-1A細胞MMP-2、E-cadherin、N-cadh

3、erin和Vimentin表達的影響及與相關通路分子ERK和AKT的相關性。
　　方法:(1)采用人子宮內(nèi)膜癌細胞（HEC-1A細胞）為體外模型，用不同濃度的rhOPN(0ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml)處理細胞24h，通過Cell Counting Kit-8(CCK-8)實驗、細胞劃痕實驗和Transwell小室實驗，檢測rhOPN對HEC-1A細胞的增殖能力、遷移能力和侵襲

4、能力的影響。(2) Westen-blot和明膠酶譜實驗檢測不同濃度的rhOPN對HEC-1A細胞MMP-2蛋白表達及其活性的影響。選用濃度為300ng/ml的rhOPN與HEC-1A細胞共培養(yǎng)，分別在不同的時間(0h、4h、8h、12h、24h、48h)，以Westen-blot和明膠酶譜實驗檢測rhOPN對HEC-1A細胞中MMP-2蛋白表達及其活性的影響。(3)選用濃度為300ng/ml的rhOPN與HEC-1A細胞共培養(yǎng)24h，

5、Western-blot和免疫熒光檢測rhOPN對HEC-1A細胞相應通路分子E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達量及定位的影響。(4)采用不同濃度的rhOPN處理細胞24h，Western-blot檢測在不同濃度下rhOPN對HEC-1A細胞相關信號通路分子ERK和AKT的表達影響。然后加入相關信號通路分子的特異性抑制劑U0126(MEK1/2抑制劑)、LY294002（PI3K抑制劑）分別抑制HEC-

6、1A細胞ERK和AKT的活化，Westen-blot檢測MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達水平的變化。
　　結果:(0)CCK-8實驗、劃痕實驗、Transwell小室結果顯示:在rhOPN為300ng/ml時，HEC-1A細胞的增殖能力、遷移能力和侵襲能力最強。(2)隨著rhOPN濃度的增加，HEC-1A細胞MMP-2蛋白表達量逐漸上升，在rhOPN為300ng/ml處理細胞24h時

7、，MMP-2的蛋白表達量最高。明膠酶譜實驗顯示:rhOPN為300ng/ml處理細胞24h時，MMP-2活性最強。(3)選取rhOPN的最佳作用條件，Westen-blot結果顯示:N-cadherin、Vimentin表達最強，E-cadherin表達最弱。免疫熒光結果與空白組相比:E-cadherin、N-cadherin和Vimentin均定位在細胞膜上。(4)Westen-blot結果表明:不同濃度的rhOPN蛋白刺激細胞后，H

8、EC-1A細胞相關信號通路分子ERK和AKT的活化均增強，分別加入以上兩種信號通路分子的抑制劑，ERK1/2、AKT的活性均會受到抑制，rhOPN蛋白對HEC-1A細胞MMP-2、N-cadherin和Vimentin的表達上調(diào)作用受到不同程度的抑制，對E-cadherin的表達下調(diào)作用也受到抑制。同時明膠酶譜實驗顯示:MMP-2的活性均受到了不同程度的抑制。
　　結論:(1)OPN可提高HEC-1A細胞的增殖能力、遷移能力和侵襲