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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
探討芍藥苷(paeoniflorin,PF)對(duì)膽紅素誘導(dǎo)原代培養(yǎng)胎鼠海馬神經(jīng)元凋亡和核轉(zhuǎn)錄因子-κB(Nuclear transcription factor-κB,NF-κB)活化的影響,及調(diào)控凋亡的可能機(jī)制。
方法:
取胎齡17~19 d大鼠的海馬神經(jīng)元進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),于原代培養(yǎng)第7天完全隨機(jī)分為:正常對(duì)照組(加DMSO)、膽紅素組(加10μg/ml膽紅素)和經(jīng)芍藥苷預(yù)處理的膽紅素組,
2、后者再按所用芍藥苷的劑量分為PF1組、PF2.5組、PF5組,分別用1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml的芍藥苷預(yù)處理24 h后棄去,再加入膽紅素。經(jīng)MTT法測(cè)定海馬神經(jīng)元存活率及Hoechst33342 DNA染色法觀察神經(jīng)元凋亡形態(tài)和凋亡率后,篩選出芍藥苷預(yù)處理的適當(dāng)劑量:進(jìn)而采用Annexin V-FITC/PI雙染色法觀察此劑量芍藥苷對(duì)膽紅素誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡形態(tài)和凋亡率的影響,并采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)膽紅素作用后不同時(shí)間(
3、3,6,12,24h)神經(jīng)元內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)的變化。
結(jié)果:
(1)與正常對(duì)照組比較,膽紅素作用24 h可顯著降低海馬神經(jīng)元存活率并升高神經(jīng)元凋亡率(P≤0.001)。
(2)與膽紅素組比較,PF(1,5μg/ml)預(yù)處理24 h可顯著降低海馬神經(jīng)元凋亡率(P<0.01),但不能明顯提高神經(jīng)元存活率(P>0.05),而PF(2.5μg/m1)預(yù)處理24 h可顯著提高海馬神經(jīng)元存活率,降低神經(jīng)
4、元凋亡率(P<0.01)。
(3)與正常對(duì)照組比較,膽紅素作用3~12 h引起NF-κB活化增加(P<0.05),但以3~6 h顯著(P<0.05);而采用2.5μg/ml芍藥苷預(yù)處理24 h可顯著抑制3~6 h NF-κB的活化(P<0.05)。
結(jié)論:
(1)膽紅素誘導(dǎo)的NF-κB活化有時(shí)間依賴性,在其作用3~6 h達(dá)高峰,膽紅素誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡可能與此時(shí)期的NF-κB活化相關(guān);
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