熱應激影響大鼠黃體功能性退化的作用機制研究.pdf

1、熱應激影響雌性動物的許多生殖功能，如卵泡發(fā)育、卵母細胞成熟和早期胚胎發(fā)育。目前，研究表明熱應激通過干擾動物的生殖內(nèi)分泌等發(fā)揮作用。同時，熱休克反應依賴于細胞信號途徑的調(diào)控。因此，本論文以假孕大鼠為研究對象，建立熱應激模型。應用ELISA、Western blot和IHC等方法，研究孕酮合成及分解代謝相關蛋白及相關信號通路元件的表達模式，以揭示熱應激影響卵巢黃體退化的作用機制，為研究熱應激影響雌性動物繁殖性能提供理論依據(jù)。主要內(nèi)容如下:<

2、br>　　1熱應激對大鼠黃體孕酮合成及分解代謝相關蛋白表達的影響
　　為探討熱應激對黃體孕酮合成及分解代謝通路相關蛋白表達的影響，本研究采用PMSG/hCG(D0)聯(lián)合處理70只(28日齡)大鼠誘導假孕，然后隨機分為非熱應激(NHS)和熱應激(HS)兩組。每天在相同時間，將HS組置于40℃熱應激2h。每天測定大鼠的飲水量、采食量及熱應激前后的直腸溫度。假孕第3天，熱應激結束后2h，采集兩組大鼠的血清和卵巢組織(n=5)。假孕第7天

3、，熱應激結束后2h，處死或PGF分別處理0h、1h、2h、8h或24 h后處死，然后收集血清和卵巢組織(n=5)。應用ELISA檢測血清孕酮濃度、Western blot和IHC檢測孕酮合成及分解代謝通路相關蛋白的表達。ELISA結果表明，熱應激對黃體形成過程中孕酮濃度無顯著影響。Western blot結果表明熱應激對黃體形成過程中StAR、P450scc和3βHSD表達無顯著影響，但PKA磷酸化底物在第3天表達高于第7天(P＜0.0

4、5)。PGF降低了兩組大鼠血清孕酮濃度，且熱應激抑制了PGF誘導的孕酮濃度下降(P＜0.05);PGF或熱應激單一處理均對PKA磷酸化底物、StAR、P450scc、3βHSD及NR4A1-F表達無顯著影響，但均誘導NR4A1-S表達上調(diào)(P＜0.05)，且熱應激降低PGF誘導的NR4A1-S表達(P＜0.05);IHC結果表明，PKA磷酸化底物主要在黃體細胞的細胞核中表達，而StAR、P450scc、3βHSD和NR4A1-F均在黃體

5、細胞的細胞質表達。上述結果提示，熱應激降低假孕大鼠PGF誘導的黃體退化過程中NR4A1-S的表達，NR4A1-S可能參與調(diào)控黃體退化過程中孕酮的分解代謝。
　　2熱應激對大鼠黃體退化中ERK1/2磷酸化及HSP70與ATF3表達的影響
　　為研究熱應激對PGF誘導的黃體退化過程中HSP70及MAPK/ATF3和PKB信號通路元件表達的影響，以假孕大鼠為試驗對象，構建熱應激模型（同試驗1）。假孕第7天，熱應激結束2h后，大鼠以

6、PGF分別處理0h、1h、2h、8h或24 h后處死，收集卵巢組織。應用Western blot和IHC檢測HSP70及MAPK/ATF3和PKB信號通路元件蛋白的表達。Western blot結果表明:與NHS組相比，熱應激沒有改變HSP70和p-ERK-1/2的基礎水平，但熱應激促進PGF誘導的HSP70和p-ERK-1/2水平的上升(P＜0.05);熱應激促進p-p38 MAPK基礎水平的上調(diào)(P＜0.05);在PGF處理2h后，