2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、鄰苯二甲酸二甲酯(Dimethylphthalate,DMP),是鄰苯二甲酸酯類化合物中的一種,主要作為增塑劑應(yīng)用于食品包裝、醫(yī)療設(shè)備、建筑裝修材料以及家庭生活用品中。隨著增塑劑的廣泛使用,DMP被大量釋放出來進(jìn)入環(huán)境。環(huán)境中的DMP可通過呼吸或飲食等方式被人體吸收。研究發(fā)現(xiàn):DMP對人體健康具有毒性作用,已被我國列為優(yōu)先控制的環(huán)境污染物。
  目前,國內(nèi)外對DMP的檢測方法主要有氣相色譜(Gas chromatography,G

2、C)、高效液相色譜(High performance liquid chromatography,HPLC)和氣相色譜-質(zhì)譜(Gaschromatography-mass spectrometry,GC-MS)聯(lián)用技術(shù),這些方法都能精確地檢測出DMP的含量,但樣品前期處理操作復(fù)雜、耗時(shí)長,需要高檔的儀器設(shè)備,不便于現(xiàn)場檢測。為方便測定DMP在環(huán)境中的污染水平,建立一種快速、簡便、靈敏度高、低成本的方法檢測環(huán)境和生活用品中DMP的含量具有

3、重要的科學(xué)意義。
  酶聯(lián)免疫分析(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)具有操作簡便快速、靈敏度高、不需昂貴的儀器設(shè)備、可在現(xiàn)場一次檢測多個(gè)樣本等優(yōu)點(diǎn),被認(rèn)為是現(xiàn)場檢測環(huán)境污染物的經(jīng)典方法。
  本研究采用重氮法將小分子化合物4-氨基鄰苯二甲酸二甲酯(Dimethyl-4-aminophthalate,DMAP)與牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和

4、卵清蛋白(Ovalbumin, OVA)進(jìn)行偶聯(lián)合成人工抗原DMAP-BSA和DMAP-OVA。通過篩選,選用DMAP-BSA作為免疫原免疫Balb/c小鼠。6次免疫結(jié)束后,獲得高效價(jià)和高靈敏度抗血清。采用雜交瘤技術(shù)融合免疫效果最佳小鼠的脾細(xì)胞和SP2/0細(xì)胞,通過ELISA法檢測雜交瘤細(xì)胞陽性和對DMP的特異性,篩選出一株能穩(wěn)定分泌DMP單克隆抗體細(xì)胞株DMP-2C11,夾心ELISA法檢測出DMP-2C11細(xì)胞株分泌抗體的亞型是Ig

5、G2a。DMP-2C11細(xì)胞株擴(kuò)大培養(yǎng)后,通過小鼠腹水法大量制備DMP的單克隆抗體,辛酸-硫酸銨法提純腹水抗體,方陣滴定法確定最佳人工抗原包被濃度為0.5μg/mL,單抗最佳稀釋倍數(shù)為4000。ELISA最適檢測條件:5%脫脂奶粉作封閉劑、二抗反應(yīng)溫度為37℃,鄰苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)作顯色劑。建立的人工抗原包被的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線y=19.68 Log(x)+20.71,相關(guān)系數(shù)R2為0.993,線性檢

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