銜接蛋白在狂犬病毒入侵細胞過程中作用的研究.pdf

1、狂犬病是遍布全球，具有極度危害的一種傳染病，世界范圍內每年因狂犬病死亡的人數(shù)約為6萬人，而其致病機制仍然未完全闡明。狂犬病的病原是狂犬病病毒(Rabies virus，RABV)，RABV屬于彈狀病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒屬(Lyssaviruses)的有囊膜病毒。RABV編碼五種結構蛋白，核蛋白(N)，大蛋白(L)基質蛋白(M)，糖蛋白(G)和磷蛋白(P)。G蛋白是RABV最重要的結構蛋白之一，在RABV感染早期發(fā)揮

2、重要作用，能與細胞膜上的受體相結合，介導RABV進入細胞內。
　　銜接蛋白復合體(Adaptor Protein Complex，AP)，是一個多聚體，其主要生理功能是分選貨物蛋白到細胞膜上。目前在哺乳動物細胞內已經(jīng)發(fā)現(xiàn)4種銜接蛋白復合體。AP2是細胞內最重要的銜接蛋白復合體，參與網(wǎng)格蛋白介導的內吞作用，起連接貨物蛋白和網(wǎng)格蛋白的作用。
　　實驗室前期利用RNA干擾技術在人類全基因組水平上篩選了與狂犬病病毒(RABV)生命周

3、期有關的宿主基因。篩選發(fā)現(xiàn)敲低AP2的μ亞基(AP2M1)表達，可以抑制RABV的感染。為研究AP2M1影響RABV感染的機制，本實驗在人胚胎腎細胞(HEK-293)和人神經(jīng)母細胞瘤(SK細胞)中敲低或過表達AP2M1，采用高內涵篩選、病毒滴度檢測等方法分析在細胞中敲低或過表達AP2M1對狂犬病病毒感染率的影響。結果表明敲低AP2M1，RABV感染率顯著下降;過表達AP2M1，RABV感染率上升。酸繞過實驗證明AP2M1在RABV感染中

4、發(fā)揮作用。采用激光共聚焦的方法觀察發(fā)現(xiàn)RABV G蛋白與AP2M1無共定位。利用免疫共沉淀實驗證明AP2M1與狂犬病病毒G蛋白無相互作用。綜上所述，AP2M1基因是在RABV感染過程中發(fā)揮作用，但不是通過與RABV G蛋白的直接作用影響病毒的感染。本研究為闡明AP2M1在RABV生命周期中具體作用奠定了基礎。
　　水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis virus，VSV)也是彈狀病毒科的一員，利用RNA干擾技術