TLR4及其相關(guān)炎癥因子與糖尿病腎病的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病的主要遠(yuǎn)期并發(fā)癥，也是導(dǎo)致終末期腎衰竭的主要原因之一。研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2DM)患者體內(nèi)單核-巨噬細(xì)胞Toll樣受體4(toll-like receptor4，TLR4)的表達(dá)和活化均有升高，其下游多種炎性因子的表達(dá)較正常人也顯著升高，說明T2DM及其并發(fā)癥的進(jìn)展與促炎狀態(tài)密切相關(guān)。但T2DM進(jìn)展至DN的機(jī)制尚

2、不明確。TLR4主要表達(dá)于單核-巨噬細(xì)胞表面，是固有免疫和炎癥反應(yīng)重要的模式識(shí)別受體，主要通過髓樣細(xì)胞分化因子88(myeloid differentiation factor，MyD88)依賴和非依賴途徑，活化NF-κB轉(zhuǎn)錄因子，啟動(dòng)下游各種炎性因子的合成和分泌，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的發(fā)生。本研究擬測定。T2DM和DN患者外周血單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)及其下游信號(hào)分子IL-6和IL-8的濃度變化，分析TLR4和IL-6、IL-8以及臨床常規(guī)指標(biāo)

3、的關(guān)系，為探討DN的炎癥反應(yīng)機(jī)制提供臨床依據(jù)。
　　方法：
　　1研究對(duì)象實(shí)驗(yàn)分為三組：T2DM組、DN組和健康對(duì)照組。T2DM組(30例，男17例，女13例，平均年齡50.66±9.35歲)和DN組(30例，男16例，女14例，平均年齡60.43±9.46歲)為2011年3月至2011年10月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院內(nèi)分泌科和腎內(nèi)科住院患者。T2DM組根據(jù)1999年世界衛(wèi)生組織糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)而確診；DN組根據(jù)其蛋白尿水平或腎

4、活檢病理檢查確診；健康對(duì)照組(30例，男10例，女20例，平均年齡49.48±8.78歲)取自同期在本院體檢中心查體的健康者。
　　2實(shí)驗(yàn)方法分別采集健康人及患者的靜脈抗凝血2ml，流式細(xì)胞分析外周血單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)；采集健康者及患者的靜脈血2ml，將分離的血清于-80℃保存，用放射免疫分析技術(shù)檢測血清IL-6和IL-8的蛋白表達(dá)水平。分析。TLR4與IL-6、IL-8以及各項(xiàng)腎功指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系。
　　3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用

5、SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本比較的t檢驗(yàn)，TLR4與多個(gè)標(biāo)間的關(guān)系采用相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1臨床數(shù)據(jù)：尿素氮(BUN)在健康對(duì)照組、T2DM組和DN組分別為4.95±0.94 mmol/L，5.26±1.57 mmol/L和12.28±6.16 mmol/L，T2DM組高于正常對(duì)照組(t=0.9151，P>0.05

6、)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；DN組高于T2DM組和對(duì)照組(t=6.0502，P<0.001；t=6.4403，P<0.001)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。尿白蛋白排泄率(UAER)在T2DM組(18例)和DN組(26例)分別為(0.03±0.01)和(1.36±1.54)g/24h，兩組之間比較(t=3.6473，p<0.001)，差異具顯著性。
　　2 TLR4的表達(dá)：流式細(xì)胞分析顯示，外周血單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)在健康對(duì)照組、T2DM組和DN組

7、分別為(53.00±9.71)％，(61.50±10.37)％和(67.30±7.90)％。健康對(duì)照組與T2DM組之間(t=3.2733，P<0.01)，T2DM組與DN組之間(t=2.4660，P<0.05)，健康對(duì)照組與DN組之間(t=5.5752，P<0.001)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　3血清中IL-6的表達(dá)水平：放射免疫分析顯示，健康對(duì)照組、T2DM組和DN組的血清IL-6分別為(94.67±18.24)pg/ml，(1

8、72.78±33.70)pg/ml和(190.11±31.31)pg/ml。T2DM和DN組均高于健康對(duì)照組(t=11.1624，P<0.001；t=14.4254，P<0.001)，DN組又高于T2DM組(t=2.0642，P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4血清中IL-8的表達(dá)水平：放射免疫分析顯示，健康對(duì)照組、T2DM組和DN組的血清IL-8分別為(0.31±0.13)ng/ml，(0.64±0.20)ng/ml，(1

9、.00±0.51)ng/ml。T2DM和DN組均高于健康對(duì)照組(t=7.1979，P<0.001；t=7.6042，P<0.001)，DN組又高于T2DM組(t=3.5946，P<0.001)，差異有顯著性。
　　5 TLR4的表達(dá)與臨床資料的相關(guān)性：所有資料齊全的患者(DN組26例，T2DM組4例)TLR4的表達(dá)與UAER顯著正相關(guān)(r=0.557，P<0.01)；DN組TLR4的表達(dá)與尿素氮(BUN)也顯著正相關(guān)(r=0.54

10、6，P<0.01)。
　　6 TLR4的表達(dá)與IL-6、IL-8的相關(guān)性：DN組TLR4的表達(dá)與IL-6、IL-8的水平呈正相關(guān)(r=0.515，P<0.05；r=0.523，P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1與健康者比較，糖尿病組和糖尿病腎病組患者外周血單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)呈逐漸升高趨勢，說明糖尿病患者TLR4的表達(dá)增高與漸趨嚴(yán)重的促炎狀態(tài)密切相關(guān)。
　　2與健康者比較，糖尿病組和糖尿病腎病組血清IL-6和

11、IL-8均顯著升高，提示慢性炎癥與T2DM及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，炎性因子的升高可反映T2DM的進(jìn)展和DN的狀態(tài)。
　　3糖尿病腎病組TLR4的表達(dá)與UAER和BUN均呈正相關(guān)，表明TLR4的表達(dá)升高可能是導(dǎo)致腎小球硬化和腎組織損傷，促使UAER和BUN升高的關(guān)鍵因素。
　　4 DN患者外周血單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)與血清IL-6、IL-8的水平呈正相關(guān)，提示各種促炎因子的大量產(chǎn)生可能與TLR4的過度激活有關(guān)，單核細(xì)胞