靈芝三萜化合物的抗炎作用及分子機(jī)制初探.pdf

1、炎癥是機(jī)體對(duì)有害刺激所發(fā)生的復(fù)雜的防御反應(yīng)，但過度的炎癥反應(yīng)會(huì)對(duì)機(jī)體造成損傷，與多種疾病相關(guān)。目前臨床上常用的抗炎藥主要有非甾體抗炎藥和甾體類抗炎藥。雖然這兩類抗炎藥都有一定的臨床抗炎效果，但長(zhǎng)期大量使用也會(huì)產(chǎn)生，如胃粘膜、肝臟、腎臟損害等一系列不良反應(yīng)。天然藥物具有來源廣、造價(jià)低、副作用小等特點(diǎn)，隨著對(duì)天然藥物研究的不斷深入，部分天然藥物的抗炎作用已經(jīng)得到認(rèn)可。尋找低毒高效的新型天然抗炎藥物是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)之一。靈芝是著名的高等藥用真

2、菌，早在兩千多年前靈芝就被我國(guó)人民所熟悉并采集使用。研究表明，靈芝三萜是靈芝中主要活性成分之一。近年來有不少文獻(xiàn)報(bào)道，靈芝三萜類化合物具有很強(qiáng)的藥理活性，如具有保肝抗腫瘤、抑制組胺釋放等作用。但對(duì)靈芝三萜類化合物的抗炎作用及其機(jī)理卻鮮有報(bào)道。本研究首先用LPS刺激小鼠巨噬細(xì)胞系A(chǔ)na-1建立細(xì)胞炎癥模型，通過MTS法檢測(cè)鹿角靈芝、赤芝、紫芝3種甲醇總提取物對(duì)細(xì)胞增殖的影響，并檢測(cè)代表性炎性介質(zhì)的分泌量。對(duì)以上3種甲醇總提取物中提取的9種

3、三萜類化合物的體外抗炎效果進(jìn)行檢測(cè)，篩選出4種高抗炎化合物。以4種高抗炎化合物為代表，通過Real-time PCR檢測(cè)TLR4、Myd88基因的表達(dá)以及通過Westernblotting檢測(cè)NF-κB通路的關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平，對(duì)其抗炎作用的潛在分子機(jī)制進(jìn)行初步探究。以高抗炎化合物ganodermanontriol為代表，觀察其對(duì)LPS/D-galN誘發(fā)小鼠急性肝炎模型的體內(nèi)抗炎作用的研究。通過分析小鼠肝臟病理切片，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)的分泌量，

4、驗(yàn)證ganodermanontriol對(duì)LPS/D-galN誘發(fā)小鼠肝炎的保護(hù)作用。
　　結(jié)果如下:1、鹿角靈芝、赤芝、紫芝3種甲醇總提取物在100μg/mL對(duì)細(xì)胞增殖有一定的抑制作用，但在25μg/mL、50μg/mL的劑量下對(duì)細(xì)胞沒有抑制作用。3種靈芝的甲醇總提取物在25μg/mL、50μg/mL濃度下對(duì)巨噬細(xì)胞NO、PGE2、TNF-α、IL-6、IL-1β釋放量與LPS組相比較均顯著降低。2、α-lignocericaci

5、d、20-OH LucidericA、20-OH LucidericN、ganodermanontriol、Ganoderiol A、Ganoderiol D、Ganoderiol F、Ergosterol peroxide、Ergosterol在5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL對(duì)細(xì)胞增殖均沒有明顯影響且NO、PGE2、TNF-α、IL-6、IL-1β分泌量與LPS組相比較不同程度的降低，表明這9種化合物均有一定的抗炎作用。

6、其中20-OH lucidericN、ganodermanontriol、Ganoderiol A、Ergosterol peroxide四種化合物抗炎作用更加顯著。3、4種代表化合物均能抑制Myd88基因表達(dá)，且抑制LPS誘發(fā)的NF-κB的激活，特別表現(xiàn)在抑制IκB-α降解以及抑制IκB-α和p65磷酸化。4、LPS/D-galN誘發(fā)小鼠急性肝炎模型，ganodermanontriol給藥組小鼠肝臟組織病變較輕，且肝臟組織中AST、A