珍黃養(yǎng)顏膠囊質(zhì)量控制及長期毒性試驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　珍黃養(yǎng)顏膠囊為新研發(fā)的復(fù)方制劑產(chǎn)品，具有補(bǔ)充氣血、滋養(yǎng)肌膚、改善面部黃褐斑等功效。本研究擬通過對珍黃養(yǎng)顏膠囊的質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究，建立有效、穩(wěn)定、可控的定性、定量分析方法，為本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考依據(jù)。此外，還對本品進(jìn)行大鼠長期毒性試驗(yàn)研究，確定其臨床安全用藥劑量，為其臨床用藥提供安全性依據(jù)。
　　方法：
　　(1)采用顯微鑒別方法對本膠囊中的茯苓、艾葉等十一味藥材進(jìn)行鑒別。
　　(2)利用TL

2、C法對本膠囊中的熟地黃、川芎、當(dāng)歸、丹參等七味藥材進(jìn)行定性鑒別。
　　(3)采用HPLC法同時(shí)測定本品中芍藥苷和丹皮酚的含量，其色譜條件如下：色譜柱為Luna C18100A(250mm×4.6mm,5um)，流動(dòng)相為乙腈-0.05％磷酸，梯度洗脫，檢測波長為230nm，流速1.00mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量10ul；并對其進(jìn)行方法學(xué)考察。
　　(4)參考《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》，建立本品的HPLC

3、指紋圖譜，其色譜條件如下：色譜柱為 Luna C18100A(250mm×4.6mm,5um)，流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸，采用梯度洗脫法，檢測波長228nm，流速0.8mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量10ul；并對該方法進(jìn)行方法學(xué)考察和采用相似系數(shù)法、夾角余弦法和2004 A中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)軟件對10批珍黃養(yǎng)顏膠囊指紋圖譜相似度進(jìn)行了評價(jià)。
　　(5)連續(xù)180 d對大鼠灌胃給藥本品2.93、1.47、0.74 g(

4、生藥).kg-1三個(gè)劑量并設(shè)置對照組，觀察給藥90 d、180 d后的毒性反應(yīng)及停藥30 d期間的恢復(fù)情況。
　　結(jié)果：
　　(1)建立了珍黃養(yǎng)顏膠囊中茯苓、艾葉等十一味藥材的顯微鑒別方法，其顯微特征性均較強(qiáng)，對本品具有鑒別意義。
　　(2)本研究中建立的川芎、當(dāng)歸、丹參等七味藥材的TLC鑒別方法，其TLC色譜圖：斑點(diǎn)均較清晰，在各供試品與對照品或?qū)φ账幉南嗤奈恢蒙巷@相同顏色斑點(diǎn)，且陰性對照均無干擾。
　　(3

5、)HPLC法測定芍藥苷和丹皮酚的含量：芍藥苷和丹皮酚分別在0.144ug~1.44ug和0.0316~0.316ug間具有較好的線性關(guān)系，r分別為0.9997和0.9998，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收率的RSD值均<3%。同時(shí)初步擬定本品每粒膠囊中含芍藥苷(C23H28O11)不得少于1.0965mg；每粒膠囊含丹皮酚(C9H10O3)不得少于0.2665mg。
　　(4)建立珍黃養(yǎng)顏膠囊的HPLC指紋圖譜：以橙皮苷峰為參照

6、峰，生成珍黃養(yǎng)顏膠囊對照指紋圖譜共有模式，確定了36個(gè)共有峰，并通過與對照品峰的比對，確認(rèn)了其中的5個(gè)共有峰成分；方法學(xué)考察中，除了重復(fù)性試驗(yàn)中個(gè)別共有峰的相對峰面積RSD值小于3.5%外，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的各共有峰的相對保留時(shí)間及相對峰面積比值RSD值均小于3%，與對照圖譜比，各批供試品的指紋圖譜相似度均>0.9。
　　(5)與對照組相比，給藥90 d后，高劑量組大鼠的攝食量減少；高、中劑量組大鼠的體重增長均較緩慢；高

7、劑量雌性組腎臟指數(shù)略升高，肺臟、胸腺指數(shù)稍降低。給藥180 d后，高、中劑量組血小板、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶升高，平均紅細(xì)胞體積降低。停藥30 d后，高、中劑量組平均紅細(xì)胞體積值降低，高劑量組血小板值升高；上述部分指標(biāo)恢復(fù)正常。
　　結(jié)論：
　　(1)本研究建立的顯微鑒別、薄層色譜法、高效液相色譜法和指紋圖譜分析方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性較好，為珍黃養(yǎng)顏膠囊的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。
　　(2)珍黃養(yǎng)顏膠囊0.74