電刺激促進2型糖尿病大鼠骨骼肌細胞葡萄糖運載體4轉(zhuǎn)位的細胞內(nèi)機制研究.pdf

1、第一部分
　　 目的:觀察電刺激對2型糖尿病大鼠(OLETF)骨骼肌細胞葡萄糖運載體4(GLUT4)轉(zhuǎn)位的影響。
　　 方法:取20只OLETF大鼠和20只SD大鼠,分離趾長伸肌,按照抑制劑和電刺激干預的不同各分為6組:電刺激組、無電刺激組、LY294002+電刺激組、LY294002組、Compound C+電刺激組、Compound C組。用免疫熒光方法觀察GLUT4在各組骨骼肌細胞膜及細胞內(nèi)膜的分布。
　　

2、 結(jié)果:免疫熒光結(jié)果提示:1.OLETF大鼠各電刺激組骨骼肌細胞膜上GLUT4分布較相應的無電刺激組明顯增多。2.SD大鼠各電刺激組骨骼肌細胞膜上GLUT4分布較相應的無電刺激組也明顯增多。
　　 結(jié)論:電刺激誘導的骨骼肌收縮可促進GLUT4轉(zhuǎn)位至細胞膜,阻斷AMPK或PI3K信號轉(zhuǎn)導通路都不能抑制GLUT4的轉(zhuǎn)位。
　　 第二部分
　　 目的:觀察電刺激對OLETF大鼠骨骼肌細胞腺苷酸激活的蛋白激酶(AMPK)

3、、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB/Akt)和Ras-絲裂原激活的蛋白激酶(Ras-MAPK)的影響,探討電刺激誘導的骨骼肌收縮促進OLETF大鼠骨骼肌細胞GLUT4轉(zhuǎn)位的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導機制。
　　 方法:取8只OLETF大鼠和8只SD大鼠,分離趾長伸肌,按照是否接受電刺激干預各分為電刺激組和無電刺激組,每組8個骨骼肌樣本,用免疫印跡方法(Western blot)測定骨骼肌中AMPK、PI3K、PKB/Akt、

4、ERK蛋白的表達和活性變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.與無電刺激組相比,OLETF大鼠和SD大鼠電刺激組骨骼肌細胞AMPK、PI3K、Akt蛋白活性均明顯增加。
　　 2.而ERK蛋白活性在兩組間的差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論:運動既可以激活骨骼肌細胞AMPK信號轉(zhuǎn)導通路,也可以激活胰島素信號通路中的PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導通路,從而促進骨骼肌細胞GLUT4轉(zhuǎn)位和葡萄糖攝取。
　　 第三部分

5、r>　　 目的:觀察AMPK抑制劑和P13K抑制劑對電刺激激活的骨骼肌信號轉(zhuǎn)導通路的影響,分析AMPK和P13K在電刺激促進骨骼肌GLLJT4轉(zhuǎn)位過程中的作用。
　　 方法:取20只OLETF大鼠和20只SD大鼠,分離趾長伸肌,按照抑制劑和電刺激干預的不同各分為6組:電刺激組、無電刺激組、LY294002+電刺激組、LY294002組、Compound C+電刺激組、Compound C組。用western blot法測定骨骼

6、肌中AMPK、PI3K、PKB/Akt蛋白的表達和活性變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.OLETF大鼠和SD大鼠LY294002+電刺激組骨骼肌細胞AMPK蛋白活性較LY294002組明顯增加。
　　 2.而Compound C+電刺激組骨骼肌細胞PI3K、Akt蛋白活性較Compound C組也明顯增加。
　　 結(jié)論:電刺激誘導的骨骼肌收縮可以激活AMPK和PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導通路,并促進GLUT4轉(zhuǎn)