蝦青素對(duì)電點(diǎn)燃癲癇大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及大鼠海馬中bcl-2、bax的表達(dá)變化.pdf

1、目的：癲癇（Epilepsy,EP）是一種神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)疾病，神經(jīng)元突然異常、同步化過(guò)度放電所引起的腦功能障礙。反復(fù)癲癇發(fā)作可引起認(rèn)知功能障礙。目前，癲癇發(fā)作引起認(rèn)知障礙的相關(guān)機(jī)制并不十分明確，可能通過(guò)凋亡、氧化應(yīng)激(oxidativestress,OS)、離子通道等病理生理機(jī)制引起認(rèn)知功能損傷?，F(xiàn)已證實(shí)，細(xì)胞凋亡途徑在癲癇引起腦功能障礙的病理過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。蝦青素(Astaxanthin,ATX)是一種類(lèi)胡蘿卜素，存在于蝦、

2、蟹、藻類(lèi)等海洋生物體內(nèi)，具有抗凋亡、抗炎、抗氧化等生物活性，對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)疾病、皮膚病、心腦血管疾病(cardiovasculardisease,CVD)的防治均有積極作用，其藥理作用引起人們的重視。本研究以雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠為研究對(duì)象，應(yīng)用慢性杏仁核電點(diǎn)燃癲癇大鼠模型，選擇蝦青素為干預(yù)藥物，運(yùn)用Morris水迷宮(Morriswatermaze,MWM)實(shí)驗(yàn)方法觀(guān)察對(duì)照組、癲癇組、低劑量蝦青素干預(yù)組、高劑量蝦青

3、素干預(yù)組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的改變，應(yīng)用Western-blot方法檢測(cè)海馬組織中bcl-2、bax凋亡調(diào)控蛋白表達(dá)情況，探討蝦青素是否具有神經(jīng)保護(hù)作用，并研究其可能的作用機(jī)制。
　　方法：將7-8周體重250-300g雄性健康SD大鼠60只，隨機(jī)分組：對(duì)照組、慢性電點(diǎn)燃癲癇組、低劑量蝦青素干預(yù)組、高劑量蝦青素干預(yù)組，每組各15只大鼠。對(duì)照組（C組）：15只，僅給予電極植入，不給予杏仁基底外側(cè)核電刺激。慢性電點(diǎn)燃癲癇組（EP組）：1

4、5只，給予杏仁基底外側(cè)核電點(diǎn)燃模型制備，每天給予發(fā)作閾值120％電刺激一次，共15天。低劑量蝦青素干預(yù)組(LD組)：15只，給予杏仁基底外側(cè)核電點(diǎn)燃模型制備，每天給予發(fā)作閾值120%電刺激一次，共15天，電刺激前1h給予蝦青素15mg/kg腹腔注射。高劑量蝦青素干預(yù)組(HD組)：15只，給予杏仁基底外側(cè)核電點(diǎn)燃模型制備，每天給予發(fā)作閾值120%電刺激一次，共15天，電刺激前1h給予蝦青素30mg/kg腹腔注射。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)于蝦

5、青素注射完畢24h后開(kāi)始進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)包括：(1)定位航行實(shí)驗(yàn)(placenavigationtest,PNT)：將迷宮按要求準(zhǔn)備好，大鼠通過(guò)置于水中游泳120秒從而適應(yīng)水池環(huán)境。次日開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)共持續(xù)5天。每日上午9點(diǎn)隨機(jī)選擇一個(gè)象限作為入水點(diǎn)，將大鼠面向池壁放入水中，4次實(shí)驗(yàn)分別從4個(gè)象限入水，尋找平臺(tái)，記錄從入水到找到隱藏在水面下平臺(tái)所用的時(shí)間即為逃避潛伏期。如果120秒大鼠仍未找到平臺(tái)，則記錄其逃避潛伏期為120秒。(2)空間探索

6、實(shí)驗(yàn)(spatialprobetest,SPT)：定位航行實(shí)驗(yàn)后去除平臺(tái)，選定和平臺(tái)區(qū)域相對(duì)的象限中點(diǎn)，將大鼠放入水池中，記錄120s內(nèi)大鼠為搜索平臺(tái)而穿越平臺(tái)的次數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組各取6只大鼠斷頭取腦，分離大鼠海馬組織，通過(guò)WesternBlot方法檢測(cè)海馬組織中bcl-2、bax表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1Morris水迷宮檢測(cè)結(jié)果：定位航行實(shí)驗(yàn)：對(duì)各組大鼠每日逃避潛伏期均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，比較發(fā)現(xiàn)：(1)第1天，與C組大鼠相比，EP

7、組大鼠的逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)（P<0.05）；與EP組相比，HD組、LD組的逃避潛伏期明顯縮短（P<0.05），但與C組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與HD組大鼠比較，LD組大鼠逃避潛伏期延長(zhǎng)，但兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（2）第2天，各組大鼠逃避潛伏期均比第一天明顯縮短（P<0.05）；C組、HD組、LD組、EP組的逃避潛伏期比較結(jié)果與第1天相同。（3）第3天，各組大鼠逃避潛伏期均比第2天明顯縮短（P<0.05）,C組、

8、HD組、LD組、EP組逃避潛伏期比較結(jié)果與第2天相同。（4）第4天，各組大鼠逃避潛伏期均比第3天明顯縮短（P<0.05）；C組、HD組、LD組及EP組的逃避潛伏期比較結(jié)果與第3天相同。（5）第5天，各組大鼠逃避潛伏期均比第4天明顯縮短（P<0.05）；C組、HD組、LD組及EP組的比較結(jié)果同第4天?？臻g探索實(shí)驗(yàn)：與C組大鼠相比，EP組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少（P<0.05）；與EP組大鼠相比，HD組及LD組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增多（P<

9、0.05）,且與C組比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與HD組大鼠比較，LD組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)減少，但兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。2Westernblot檢測(cè)結(jié)果：EP組bcl-2表達(dá)水平較C組明顯降低（P<0.05）。HD組及LD組bcl-2表達(dá)水平較EP組明顯升高（P<0.05）。C組、HD組及LD組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與HD組大鼠比較，LD組大鼠bcl-2表達(dá)水平降低，但兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0

10、.05）。EP組bax表達(dá)水平較C組明顯升高（P<0.05）,HD組及LD組bax表達(dá)水平較EP組明顯降低（P<0.05）。C組、HD組及LD組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與HD組大鼠比較，LD組大鼠bax表達(dá)水平升高，但兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、本實(shí)驗(yàn)成功建立了慢性電點(diǎn)燃癲癇大鼠模型，癲癇發(fā)作可引起認(rèn)知功能損傷。
　　2、癲癇發(fā)作可降低海馬組織中抗凋亡蛋白bcl-2的表達(dá)，