吸煙對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞在哮喘免疫平衡中作用的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：研究香煙煙霧暴露對(duì)支氣管哮喘（簡(jiǎn)稱(chēng)哮喘）大鼠肺組織樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）、血漿及支氣管肺泡灌洗液（BALF）中干擾素（interferon，IFN）-γ、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-4、10、12表達(dá)的影響，探討吸煙加重哮喘氣道炎癥的免疫學(xué)機(jī)制。方法：50只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、哮喘組、煙霧暴露+哮喘組、布地奈德+哮喘組、布地奈德+煙霧暴露+哮喘組

2、，建立哮喘大鼠模型、哮喘大鼠煙霧暴露模型以及布地奈德干預(yù)模型。收集BALF 進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)。采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定肺組織OX-62 染色陽(yáng)性細(xì)胞（即DCs）的數(shù)量及分布，免疫印跡法（Western blot）測(cè)定肺組織OX-62蛋白的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）測(cè)定血漿和BALF中IFN-γ、IL-4、10、12的表達(dá)。結(jié)果：1. BALF 白細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞分類(lèi)比較（1）與對(duì)照組[（9±3）×107/L、（1.25±0.

3、51）％、（6.37±3.50）％]相比，哮喘組大鼠BALF 白細(xì)胞數(shù)量、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞比例[（68±8）×107/L、（9.36±2.35）％、（22.26±6.53）％]和煙霧暴露+哮喘組[（89±12）×107/L、（21.74±4.82）％、（24.15±14.40）％]增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（2）與哮喘組[（1.07±0.39）％]相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠BALF 嗜酸性粒細(xì)胞[（4.50±1.

4、63）％]減少，白細(xì)胞數(shù)量、中性粒細(xì)胞比例增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（3）與布地奈德+哮喘組[（26±6）×107/L、（2.76±0.93）％、（1.00±0.38）％]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠BALF 白細(xì)胞數(shù)量、中性粒細(xì)胞比例[（38±7）×107/L、（4.19±0.81）％]增加，嗜酸性粒細(xì)胞比例[（0.28±0.14）％]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01、P<0.05和P<0.01）。

5、2. 肺組織DCs 數(shù)量和OX-62蛋白表達(dá)的比較（1）與對(duì)照組[（6.6±2.6）個(gè)/mm2]相比，哮喘組和煙霧暴露+哮喘組大鼠肺組織DCs 數(shù)量[（11.1±2.6）個(gè)/mm2、（26.8±4.8）個(gè)/mm2]增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠肺組織DCs 數(shù)量增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與布地奈德+哮喘組[（7.6±2.3）個(gè)/mm2]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠

6、肺組織DCs 數(shù)量[（15.7±2.6）個(gè)/mm2]增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；（2）與對(duì)照組（0.37±0.06）相比，哮喘組和煙霧暴露+哮喘組大鼠肺組織OX-62蛋白表達(dá)（0.47±0.07、0.98±0.11）增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠肺組織OX-62蛋白表達(dá)增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與布地奈德+哮喘組（0.40±0.05）相比，布地奈德+煙霧暴露

7、+哮喘組大鼠肺組織OX-62蛋白表達(dá)（0.61±0.05）增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。3. 血漿和BALF中IFN-γ和IL-4表達(dá)的比較（1）與對(duì)照組[（143.83±21.31）pg/ml、（125.79±25.85）pg/ml）]相比，哮喘組大鼠血漿、BALF中IFN-γ表達(dá)[（58.55±14.01）pg/ml、（49.21±18.71）pg/ml]和煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IFN-γ表達(dá)[（9.69±

8、3.74）pg/ml、（10.89±9.67）pg/ml）]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IFN-γ表達(dá)減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與布地奈德+哮喘組[（134.03±18.41）pg/ml、（119.04±18.79）pg/ml）]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IFN-γ表達(dá)[（100.96±15.24）pg/ml、（85.64±

9、16.12）pg/ml）]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（2）與對(duì)照組[（10.37±3.16）pg/ml、（6.18±2.98）pg/ml）]相比，哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-4表達(dá)[（21.60±4.34）pg/ml、（13.43±5.19）pg/ml）]和煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-4表達(dá)[（36.97±5.89）pg/ml、（25.42±6.54）pg/ml）]增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<

10、0.01）；與哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-4表達(dá)增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與布地奈德+哮喘組[（13.06±4.11）pg/ml、（6.08±3.32）pg/ml）]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-4表達(dá)[（25.36±5.51）pg/ml、（15.72±6.37）pg/ml）]增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。4. 血漿和BALF中IL-10和IL-1

11、2表達(dá)的比較（1）與對(duì)照組[（214.39±22.64）pg/ml、（165.63±23.37）pg/ml）]相比，哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-10表達(dá)[（116.17±14.57）pg/ml、（106.51±17.18）pg/ml]和煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-10表達(dá)[（63.02±9.80）pg/ml、（51.43±9.41）pg/ml）]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘

12、組大鼠血漿、BALF中IL-10表達(dá)減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與布地奈德+哮喘組[（75.06±14.56）pg/ml、（65.59±9.58）pg/ml）]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-10表達(dá)[（114.48±16.54）pg/ml、（77.90±11.01）pg/ml）]增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（2）與對(duì)照組[（320.46±13.82）pg/ml、（267.7

13、9±19.29）pg/ml）]相比，哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-12表達(dá)[（39.55±8.40）pg/ml、（36.34±11.71）pg/ml）]和煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-12表達(dá)[（27.54±5.93）pg/ml、（22.00±9.63）pg/ml）]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-12表達(dá)減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與

14、布地奈德+哮喘組[（313.86±18.82）pg/ml、（266.83±12.01）pg/ml）]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠血漿、BALF中IL-12表達(dá)[ （214.82±11.73） pg/ml、（159.73±16.18）pg/ml）]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。5. 相關(guān)性分析肺組織DCs 數(shù)量和BALF 白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)（分別r=0.757、0.801、0.624，均P<0

15、.01），與血漿和BALF中IL-10、12表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（分別r=-0.519、-0.680、-0.657、-0.667，P<0.05、P<0.01、P<0.01和P<0.01）；血漿IL-10表達(dá)與血漿IFN-γ/IL-4比值呈正相關(guān)（r=0.533， P<0.01）， 血漿和BALF中IL-12表達(dá)分別與血漿和BALFIFN-γ/IL-4 比值呈正相關(guān)（分別r=0.730、0.572，均P<0.01）。結(jié)論：香煙煙霧暴露可以上調(diào)哮喘

16、大鼠模型肺組織DCs 數(shù)量以及下調(diào)IL-10和IL-12的表達(dá)，從而影響氣道炎癥、Th1/Th2平衡以及布地奈德的治療效果，這可能是吸煙加重和改變哮喘氣道炎癥的免疫學(xué)機(jī)制之一。
　　
　　
　　 第二部分
　　 目的：研究香煙煙霧暴露對(duì)哮喘大鼠骨髓來(lái)源DCs 共刺激分子CD80、CD86、IL-10、12表達(dá)的影響及其與淋巴細(xì)胞活化和Th1/Th2平衡的關(guān)系，從細(xì)胞水平探討吸煙加重哮喘氣道炎癥的免疫學(xué)機(jī)

17、制。方法：50只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、哮喘組、煙霧暴露+哮喘組、布地奈德+哮喘組、布地奈德+煙霧暴露+哮喘組，建立哮喘大鼠模型、哮喘大鼠煙霧暴露模型以及布地奈德干預(yù)模型，培養(yǎng)各組大鼠骨髓來(lái)源DCs及脾臟來(lái)源淋巴細(xì)胞，同時(shí)各組均進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR），收集細(xì)胞及細(xì)胞上清液。采用流式細(xì)胞儀測(cè)定DCs 共刺激分子CD80、CD86表達(dá)，ELISA 法測(cè)定各組細(xì)胞上清液中IL-10、12表達(dá)以及MLR后細(xì)胞上清液中IFN-

18、γ、IL-4表達(dá)，MTT 法測(cè)定淋巴細(xì)胞的增殖活性。結(jié)果：1. DCs 共刺激分子CD80和CD86表達(dá)的比較（1）與對(duì)照組（54.4±4.1）和哮喘組（57.9±4.8）相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs 共刺激分子CD80表達(dá)（43.3±4.4）減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（2）與對(duì)照組（35.1±4.8）相比，哮喘組大鼠DCs 共刺激分子CD86表達(dá)（51.1±8.6）增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與

19、哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs共刺激分子CD86表達(dá)（36.5±4.1）減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（3）與布地奈德+哮喘組（55.4±4.7、37.7±5.5）相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs 共刺激分子CD80、CD86表達(dá)（46.7±4.0、28.2±5.2）減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。2. DCs IL-10和IL-12表達(dá)的比較（1）與對(duì)照組[（57.40±13.11）pg/

20、ml] 相比， 煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IL-10表達(dá)[（119.67±26.65）pg/ml]增加；與哮喘組[（279.98±32.23）pg/ml]相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IL-10表達(dá)減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與布地奈德+哮喘組[（68.26±13.67）pg/ml]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IL-10表達(dá)[（99.83±23.43）pg/ml]增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

21、01）；（2）與對(duì)照組[（42.89±8.23）ng/ml]相比，哮喘組和煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IL-12表達(dá)[（25.03±8.97）ng/ml、（15.15±4.25）ng/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IL-12表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與布地奈德+哮喘組[（38.08±6.93）ng/ml]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IL-

22、12表達(dá)[（20.69±4.32）ng/ml]減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。3. MLR 結(jié)果比較（1）與對(duì)照組（0.3740±0.0045）相比，哮喘組大鼠DCs 刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力（0.4023±0.0085）升高，煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs 刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力（0.3613±0.0052）降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與布地奈德+哮喘組（0.3722±0.0063）相比，布地奈德+煙

23、霧暴露+哮喘組大鼠DCs 刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力（0.3644±0.0063）降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；（2）與對(duì)照組[（251.43±9.41）pg/ml]相比，哮喘組和煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IFN-γ表達(dá)[（178.19±8.74）pg/ml、（97.13±11.09）pg/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IFN-γ表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

24、（P<0.01）。與布地奈德+哮喘組[（243.36±9.92）pg/ml]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IFN-γ表達(dá)[（150.37±10.25）pg/ml]減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；（3）與對(duì)照組[（71.87±4.46）pg/ml]相比，哮喘組和煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IL-4表達(dá)[ （91.13±4.67）pg/ml、（125.78±5.66）pg/ml]增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.

25、01）；與哮喘組相比，煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IL-4表達(dá)增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與布地奈德+哮喘組[（74.18±4.62）pg/ml]相比，布地奈德+煙霧暴露+哮喘組大鼠DCs IL-4表達(dá)[（100.26±9.39） pg/ml] 增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。4. 相關(guān)性分析DCs 共刺激分子CD80表達(dá)與IL-12、淋巴細(xì)胞增殖活性呈顯著正相關(guān)（分別r=0.463、0.527，均P<0.01）

26、，與IL-10表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性。共刺激分子CD86表達(dá)與IL-10、淋巴細(xì)胞增殖活性表達(dá)呈顯著正相關(guān)（分別r=0.661、0.695，均P<0.01）。與IL-12表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性。DCs IL-10表達(dá)與淋巴細(xì)胞增殖活性呈顯著正相關(guān)（r=0.739， P<0.01），IL-12表達(dá)的與IFN-γ/IL-4 比值呈顯著正相關(guān)（r=0.705，P<0.01）。IL-10與IL-12表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.339， P<0.05）。結(jié)論

27、：香煙煙霧暴露可以調(diào)節(jié)哮喘大鼠模型骨髓來(lái)源DCs 共刺激分子CD80、CD86 以及IL-10和IL-12表達(dá)，進(jìn)而影響淋巴細(xì)胞活化、Th1/Th2平衡以及布地奈德治療效果，這可能是吸煙加重和改變哮喘氣道炎癥的免疫學(xué)機(jī)制之一。
　　
　　 第三部分
　　 第一節(jié)
　　 目的：觀察不同實(shí)驗(yàn)條件尼古丁對(duì)哮喘大鼠骨髓來(lái)源DCs 共刺激分子CD80和CD86 以及IL-10、12表達(dá)的影響，研究其與淋巴細(xì)胞活化及

28、Th1/Th2平衡的關(guān)系，從細(xì)胞水平探討尼古丁加重哮喘氣道炎癥的免疫學(xué)機(jī)制。方法：制備哮喘大鼠模型，培養(yǎng)骨髓來(lái)源DCs及脾臟來(lái)源淋巴細(xì)胞，隨機(jī)分為對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行以下研究。①尼古丁作用的濃度依賴(lài)性研究：分別用50、100、200、400μg/ml 尼古丁孵育細(xì)胞，72h后收集細(xì)胞及細(xì)胞上清液。②尼古丁作用的時(shí)間依賴(lài)性研究：用400μg/ml的尼古丁與細(xì)胞分別孵育0、4、8、12、24、72h，同時(shí)各組均進(jìn)行MLR，收集細(xì)胞上清液。采

29、用流式細(xì)胞儀測(cè)定DCs 共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)，ELISA 法測(cè)定各組細(xì)胞上清液IL-10、12表達(dá)以及MLR后細(xì)胞上清液IFN-γ、IL-4表達(dá)，MTT 法測(cè)定淋巴細(xì)胞的增殖活性。結(jié)果：1.不同濃度尼古丁作用下DCs CD80、CD86、IL-10和IL-12表達(dá)的比較（1）與對(duì)照組[（57.39±3.31）、（21.68±7.98）ng/ml]相比，400μg/ml 尼古丁組DCs CD80、IL-12表達(dá)[（48.84

30、±4.12）、（9.09±4.99）ng/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（2）與對(duì)照組[（272.52±23.43）pg/ml]相比， 200、400μg/ml 尼古丁組DCs IL-10表達(dá)[（206.52±21.33）pg/ml、（130.87±23.32）pg/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。2.不同濃度尼古丁作用下MLR 結(jié)果的比較（1）與對(duì)照組（0.3271±0.0092）相比，100

31、、200、400μg/ml 尼古丁組DCs 刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力[（0.2888±0.0119）、（0.2654±0.0129）、（0.2544±0.0094）]降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（2）與對(duì)照組[（192.91±11.16）pg/ml]相比，200、400μg/ml 尼古丁組MLR后IFN-γ表達(dá)[（147.01±12.47）pg/ml、（82.88±12.63）pg/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

32、（均P<0.01）；（3）與對(duì)照組[（55.20±7.17）pg/ml]相比，200、400μg/ml 尼古丁組MLR后IL-4表達(dá)[（41.35±4.46）pg/ml、（28.11±5.66）pg/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。3. 尼古丁對(duì)DCs IL-10和IL-12表達(dá)影響的時(shí)間依賴(lài)性（1）DCs與400μg/ml的尼古丁分別孵育4、8、12、24、72h后，與對(duì)照組[（273.19±33.57）pg/ml

33、、（271.19±32.81）pg/ml、（269.60±35.69）pg/ml]相比，12、24、72h 尼古丁組IL-10表達(dá)[（241.82±30.63）pg/ml、（198.38±27.09）pg/ml、（151.15±21.80）pg/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（2）與對(duì)照組[（23.55±8.43）ng/ml、（25.29±7.57）ng/ml]相比，12h 尼古丁組IL-12表達(dá)[（38.23±8

34、.31）ng/ml]增加，72h 尼古丁組IL-12表達(dá)[（8.67±4.46）ng/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。4. 尼古丁對(duì)MLR 影響的時(shí)間依賴(lài)性（1）DCs與400μg/ml 尼古丁分別孵育4、8、12、24、72h后，與對(duì)照組[（0.3538±0.010（0.3450±0.0086）、（0.3298±0.0089）]相比，12、24、72h 尼古丁組刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力[（0.3114±0.00

35、83）、（0.2882±0.0112）、（0.2583±0.0091）]降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（2）與對(duì)照組[（192.18±12.21）ng/ml、（195.40±14.05）ng/ml]相比，12h 尼古丁組IFN-γ表達(dá)[（226.23±14.84）ng/ml]增加，72h 尼古丁組IFN-γ表達(dá)[（156.13±19.84）ng/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（3）與對(duì)照組[（98.

36、18±10.17）pg/ml、（95.05±4.83）pg/ml、（94.04±15.25）pg/ml]相比，12、24、72h 尼古丁組MLR后IL-4表達(dá)[（83.25±9.27）pg/ml、（71.57±9.53）pg/ml、（70.72±8.45）pg/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。結(jié)論：一定濃度的尼古丁可以抑制哮喘大鼠DCs 共刺激分子CD80和CD86 以及IL-10和IL-12的表達(dá)，降低DCs 刺激

37、淋巴細(xì)胞的增殖能力，影響Th1/Th2平衡，并呈時(shí)間依賴(lài)性，這可能是吸煙加重和改變哮喘的氣道炎癥反應(yīng)的免疫學(xué)機(jī)制之一。
　　
　　
　　 第二節(jié)
　　 目的：通過(guò)觀察尼古丁對(duì)哮喘大鼠骨髓來(lái)源DCs Toll 受體轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中重要接頭蛋白髓樣分化因子88（MyD88）以及炎癥轉(zhuǎn)錄因子—核因子（nuclear factor，NF）-κB表達(dá)影響，研究其與IL-10、12 以及淋巴細(xì)胞活化、Th1/Th2平衡的關(guān)

38、系，從細(xì)胞水平進(jìn)一步探討尼古丁加重哮喘的免疫學(xué)機(jī)制。方法：制備哮喘大鼠模型，培養(yǎng)骨髓來(lái)源的DCs及脾臟來(lái)源的淋巴細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為四組：對(duì)照組、尼古丁組、哮喘組和尼古丁+哮喘組，其中對(duì)照組和哮喘組大鼠DCs在培養(yǎng)七天后在培養(yǎng)液中加入一定體積的PBS 繼續(xù)培養(yǎng)72 h，尼古丁組和尼古丁+哮喘組大鼠DCs在培養(yǎng)七天后加入濃度為400μg/ml 尼古丁作用72 h。同時(shí)各組均進(jìn)行MLR，收集細(xì)胞及細(xì)胞上清液。采用Western blot 法測(cè)

39、定細(xì)胞內(nèi)MyD88的表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)方法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)NF-κB的表達(dá)，ELISA 法測(cè)定各組細(xì)胞上清液IL-10、12表達(dá)以及MLR后細(xì)胞上清液中IFN-γ、IL-4表達(dá)，MTT 法測(cè)定DCs 刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力。結(jié)果：1. DCs IL-10和IL-12表達(dá)的比較（1）與對(duì)照組[（57.13±14.89）pg/ml] 相比，哮喘組和尼古丁+哮喘組DCs IL-10表達(dá)[（275.85±34.96）pg/ml，（134.27

40、±23.67）pg/ml]增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，尼古丁+哮喘組DCs IL-10表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；（2）與對(duì)照組[（42.67±9.55）ng/ml] 相比， 哮喘組和尼古丁+哮喘組DCs IL-12表達(dá)[（21.70±11.24）ng/ml，（9.57±4.30）ng/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，尼古丁+哮喘組DCs IL-12表達(dá)

41、減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2. DCs MyD88和NF-κB表達(dá)的比較（1）與對(duì)照組（1.43±0.14）相比，尼古丁組、哮喘組和尼古丁+哮喘組DCs MyD88表達(dá)[（1.30±0.13），（1.22±0.14），（0.75±0.10）]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別P<0.05、P<0.01和P<0.01）；與哮喘組相比，尼古丁+哮喘組DCs MyD88表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；（2）與對(duì)照組

42、（0.34±0.04）相比，尼古丁組、哮喘組和尼古丁+哮喘組DCs NF-κB表達(dá)[（0.17±0.03），（0.15±0.02），（0.12±0.03）]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，尼古丁+哮喘組DCs NF-κB表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。3. MLR 結(jié)果比較（1）與對(duì)照組（0.3790±0.0066）相比，哮喘組DCs 刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力（0.3965±0.0118）

43、升高，尼古丁組、尼古丁+哮喘組DCs 刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力[（0.3666±0.0144），（0.3680±0.0122）]降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別P<0.01、P<0.05和P<0.05）；與哮喘組相比，尼古丁組和尼古丁+哮喘組DCs 刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；（2）與對(duì)照組[（253.11±10.18）pg/ml]相比，哮喘組和尼古丁+哮喘組DCs IFN-γ表達(dá)[ （

44、185.26±10.91）pg/ml，（78.74±9.10）pg/ml]減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；與哮喘組相比，尼古丁+哮喘組DCs IFN-γ表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；（3）與對(duì)照組[（70.96±7.26）pg/ml]相比，尼古丁+哮喘組DCs IL-4表達(dá)[（46.61±5.11）pg/ml]減少，哮喘組DCs IL-4表達(dá)[（100.03±4.71）pg/ml]增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

45、（均P<0.01）；與哮喘組相比，尼古丁+哮喘組DCs IL-4表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。4. 相關(guān)性分析DCs MyD88表達(dá)與NF-κB、IL-12呈顯著正相關(guān)（r=0.648、0.644，均P<0.01）。DCsNF-κB表達(dá)與IL-12呈顯著正相關(guān)（r=0.607， P<0.01）。IL-10與IL-12的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.388，P<0.05）。DCs IL-10表達(dá)與IFN-γ/IL-4 比值呈

46、顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.757，P<0.01），與淋巴細(xì)胞增殖活性呈顯著正相關(guān)（r=0.544， P<0.01）；IL-12表達(dá)與IFN-γ/IL-4 比值呈顯著正相關(guān)（r=0.657， P<0.01）。結(jié)論：尼古丁可以抑制哮喘大鼠DCs MyD88、NF-κB 以及IL-10和IL-12的表達(dá)，降低DCs 刺激淋巴細(xì)胞的增殖能力，并影響Th1/Th2平衡，這可能是吸煙加重哮喘的免疫學(xué)機(jī)制之一。其中MyD88—NF-κB 轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能在尼