五味子乙素預(yù)防苯并(a)芘致HTR8-SVneo細(xì)胞侵襲力損傷的研究.pdf

1、目的：
　　以HTR8/SVneo（HTR）細(xì)胞株為載體，建立苯并（a）芘（Benzo(a)pyrene，BaP）細(xì)胞染毒模型，研究五味子乙素（Schisandrin B，Sch B）對BaP致HTR細(xì)胞株侵襲力損傷的影響，以及Sch B干預(yù)后染毒細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）及基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的表達(dá)，探究Sch B預(yù)防保護(hù)BaP生殖毒性的機制，為臨床應(yīng)用天然藥物保胎護(hù)胎奠定科學(xué)基礎(chǔ)。
　　方法：

2、　　利用MTS細(xì)胞增殖實驗檢測BaP、Sch B對HTR細(xì)胞增殖的影響，明確染毒藥物BaP及干預(yù)藥物Sch B的作用濃度，以構(gòu)建染毒模型及藥物干預(yù)模型；利用Transwell侵襲實驗檢測染毒模型以及藥物干預(yù)模型組中HTR細(xì)胞侵襲力的改變；利用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immnosorbent assay，ELISA）檢測各模型細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中MMP-2及MMP-9的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、MTS

3、細(xì)胞增殖實驗
　　與對照組相比，不同濃度BaP作用24h后明顯抑制了HTR細(xì)胞的增殖（P<0.05），隨著BaP濃度的增大，對HTR細(xì)胞的增殖抑制也隨之增大；當(dāng)BaP濃度達(dá)到20μM時，其細(xì)胞增殖抑制作用最明顯（P<0.01）；當(dāng)BaP濃度達(dá)到50μM時，其對細(xì)胞增殖的抑制作用反而有所下降。與對照組相比，Sch B在10μM濃度以下單獨作用于細(xì)胞6h，并未對細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響（P>0.05），而10μM濃度的Sch B對HTR細(xì)胞增

4、殖有抑制作用（P<0.05）。最終選取BaP染毒濃度為20μM，Sch B干預(yù)濃度為0.5μM、1μM、2μM。與對照組相比，Sch B干預(yù)后細(xì)胞存活率明顯高于BaP染毒組（P<0.05）。
　　2、Transwell侵襲實驗
　　與對照組相比，DMSO溶劑組的細(xì)胞侵襲力無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），BaP染毒組的細(xì)胞侵襲力明顯下降（P<0.01），0.5μM、1μM、2μM濃度的Sch B干預(yù)組細(xì)胞侵襲力也下降（P<0.0

5、5）；與BaP染毒組相比，0.5μM、1μM、2μM濃度的Sch B干預(yù)組的細(xì)胞侵襲力明顯增高（P<0.05），且其隨著Sch B濃度的增加而增高。
　　3、ELISA實驗
　?、費MP-2的表達(dá)
　　與對照組相比，DMSO溶劑組的細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中MMP-2表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），BaP染毒組與Sch B干預(yù)組細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中MMP-2的表達(dá)均有所下降（P<0.05）；與BaP染毒組相比，0.5μM、1μ

6、M、2μM濃度的Sch B干預(yù)組細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中MMP-2表達(dá)明顯升高（P<0.05），且MMP-2的表達(dá)隨著Sch B濃度的增大而增加。
　?、贛MP-9的表達(dá)
　　與對照組相比，DMSO溶劑組的細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中MMP-9表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），BaP染毒組與Sch B干預(yù)組細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中MMP-9的表達(dá)均有所下降（P<0.05）；與BaP染毒組相比，0.5μM、1μM、2μM濃度的Sch B干預(yù)組細(xì)胞培