比阿培南等抗菌藥誘導(dǎo)革蘭陰性菌內(nèi)毒素釋放的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、目的：研究比阿培南(Biapenem)等抗菌藥在不同藥物濃度和不同作用時(shí)間下誘導(dǎo)銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，Pa)及鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii，A.baumannii)等革蘭陰性菌(Gram negativebacteria，GNB)釋放內(nèi)毒素(Lipopolysaccharide，LPS)情況，以頭孢他啶為對(duì)照藥品探討LPS釋放的發(fā)生機(jī)制及其與細(xì)菌菌量變化以及細(xì)菌形態(tài)學(xué)

2、改變的相關(guān)性。
　　方法：選擇目前臨床上GNB感染中常見(jiàn)的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aerugirtosa，Pa)和鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii，A.baumannii)，以及4種不同的抗菌藥物：比阿培南(Biapenem，BIPM)、美羅培南(Meropenem，MEM)、左氧氟沙星(Levofloxacin，LVFX)、頭孢他啶(Ceftazidime，CAZ)作為研究對(duì)象。4種抗菌

3、藥物以0.5MIC、1MIC、5MIC和10MIC濃度分別作用于兩種細(xì)菌，于0h、1h、2h、4h、7h、11h、24h取1ml培養(yǎng)液過(guò)濾，采用動(dòng)態(tài)濁度法(Tachypleus amebocytelysate Test，TAL Test)檢測(cè)濾液中LPS水平，同時(shí)設(shè)不含藥物的對(duì)照管及不含細(xì)菌和藥物的空白管。采集0.5MIC各抗菌藥物培養(yǎng)不同時(shí)間的培養(yǎng)液，離心取沉淀涂片，革蘭染色后光鏡下觀察菌體形態(tài)變化。各抗菌藥以0.5MIC濃度分別作用

4、于兩種細(xì)菌，同時(shí)以不加抗菌藥為對(duì)照組，于2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、24h取培養(yǎng)液8毫升測(cè)定OD625nm，以檢測(cè)細(xì)菌數(shù)量變化。
　　結(jié)果：
　　1.不同抗菌藥物對(duì)細(xì)菌產(chǎn)生LPS的影響當(dāng)4種抗菌藥物以0.5MIC作用于鮑曼不動(dòng)桿菌時(shí)，在0～11h間，LPS釋放量為：CAZ>LVFX=BIPM>MEM，BIPM與LVFX間無(wú)顯著性差異(P>0.05)；24h時(shí)，BIPM明顯低于LVFX(P<0.01

5、)，5MIC和10MIC時(shí)，LPS的釋放量為：CAZ>MEM>BIPM>LVFX。
　　當(dāng)4種抗菌藥物以0.5MIC作用于銅綠假單胞菌時(shí)，LPS的釋放量為：MEM>CAZ>LVFX>BIPM；以5MIC和10MIC作用于銅綠假單胞菌時(shí)，LPS的釋放量為L(zhǎng)VFX>CAZ>BIPM=MEM，BIPM與MEM間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　2.不同濃度的抗菌藥物對(duì)細(xì)菌產(chǎn)生LPS的影響不同濃度各藥物作用于A.baumannii

6、和Pα.兩種細(xì)菌時(shí)，隨著藥物濃度的增加，LPS釋放量減少，在0.5MIC誘導(dǎo)細(xì)菌釋放LPS較多，5MIC和10MIC釋放LPS均較少。
　　3.不同時(shí)間抗菌藥物對(duì)細(xì)菌產(chǎn)生LPS的影響隨著抗菌藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其誘導(dǎo)細(xì)菌釋放LPS累計(jì)量也逐漸增加。四種藥物5MIC及10MIC濃度作用于A.baumannii，在0至7h時(shí)間段內(nèi)釋放的LPS較多。
　　4.不同菌種對(duì)細(xì)菌產(chǎn)生LPS的影響對(duì)照組：隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，兩種細(xì)菌自發(fā)釋

7、放LPS的量逐漸增加，自0h至24h，A.baumannii釋放LPS的量高于Pα.。
　　抗菌藥物組：4種抗菌藥物以各濃度作用于兩種細(xì)菌，LPS釋放情況各不相同。以0.5MIC作用于兩種細(xì)菌在11～24h，誘導(dǎo)Pα.釋放LPS速度明顯高于A.baumannii；藥物以5MIC及10MIC濃度作用時(shí)，Pα.釋放LPS水平明顯低于A.baumannii。
　　5.0.5MIC抗菌藥物作用后細(xì)菌形態(tài)學(xué)變化CAZ：光鏡下，對(duì)A.b

8、aumannii和Pα.作用4小時(shí)后即可觀察到細(xì)菌呈現(xiàn)絲狀伸展，7小時(shí)后可發(fā)現(xiàn)細(xì)菌菌體呈長(zhǎng)細(xì)絲狀改變。
　　LVFX：光鏡下，A.baumannii和Pα.暴露在LVFX4小時(shí)后，細(xì)菌形態(tài)變化不明顯，作用7小時(shí)后，可呈現(xiàn)菌體明顯拉長(zhǎng)。
　　MEM：A.baumannii暴露在MEM4小時(shí)后，光鏡下可發(fā)現(xiàn)球狀的菌體，作用7小時(shí)后，細(xì)菌菌體可呈現(xiàn)明顯球狀。而對(duì)Pα.作用4小時(shí)后，光鏡下有些Pα.菌體呈現(xiàn)明顯拉長(zhǎng)，作用7小時(shí)后，光

9、鏡下可見(jiàn)長(zhǎng)絲狀和球狀菌體共存。
　　BIPM：A.baumannii暴露在BIPM4小時(shí)后，光鏡下可發(fā)現(xiàn)些許菌體呈球形，作用7小時(shí)后，大多數(shù)菌體可呈現(xiàn)明顯球狀。而Pα.暴露在BIPM相同時(shí)間后，細(xì)菌形態(tài)均呈紡錘形改變。
　　6.抗菌藥對(duì)細(xì)菌數(shù)量的影響A.baumannii：各抗菌藥以0.5MIC的濃度作用于A.baumannii，在0～6h細(xì)菌增量速度與不加藥的對(duì)照組大致相同，CAZ組在6～14h細(xì)菌數(shù)量逐漸減少，而在14～

10、24h后，細(xì)菌數(shù)量又持續(xù)增加；LVFX組在6h～24h細(xì)菌數(shù)量持續(xù)增長(zhǎng)，但增長(zhǎng)速度低于0～6h；MEM和BIPM組在6h～24h細(xì)菌數(shù)量逐漸減少。
　　Pα.：各抗菌藥以0.5MIC的濃度作用于Pα.，細(xì)菌數(shù)量隨時(shí)間延長(zhǎng)持續(xù)增加，但增長(zhǎng)速度低于不加藥的對(duì)照組。
　　結(jié)論：
　　1.與相同作用濃度的頭孢他啶相比：對(duì)于鮑曼不動(dòng)桿菌，左氧氟沙星、美羅培南和比阿培南釋放的LPS均較少；對(duì)于銅綠假單胞菌，低濃度時(shí)美羅培南釋放的L