小鼠視覺系統(tǒng)中血管發(fā)育與Reelin表達的關系.pdf

1、實驗利用冰凍切片技術、震蕩切片技術、免疫熒光染色、明膠墨汁灌注和HE染色等方法，探究脊椎動物小鼠視覺系統(tǒng)中血管發(fā)育與Reelin表達的相關性及Reelin在成年鯽魚、牛蛙、家鴿和家兔等幾種脊椎動物視網膜中的表達。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：脊椎動物小鼠視覺系統(tǒng)中血管發(fā)育與Reelin表達的相關性研究。實驗目的：探究脊椎動物小鼠視覺系統(tǒng)中血管發(fā)育與Reelin表達的相關性。實驗方法：將實驗對象分成野生型和 Reeler小鼠兩

2、組。野生型小鼠取 P0（小鼠出生當天記為 P0），P3， P7，P14，P20和成年等各年齡點，分別取其視網膜、上丘、視皮層V1區(qū)進行免疫熒光染色和明膠墨汁灌注，觀察血管的發(fā)育和Reelin的表達情況。對視網膜進行鋪片和冰凍切片，CollagenⅣ抗體染色，觀察其血管的發(fā)育情況。對上丘和皮層V1區(qū)的研究中，用明膠墨汁灌注的方法顯示血管，觀察該區(qū)域中血管的發(fā)育情況。對震蕩切片，用GFAP抗體和Reelin抗體進行免疫熒光染色分別顯示與血管

3、發(fā)育相關的星形膠質細胞及Reelin的表達情況。Reeler小鼠取P0和成年階段視網膜用CollagenⅣ抗體進行免疫熒光染色，觀察血管的發(fā)育情況。實驗結果：（1）CollagenⅣ染色顯示小鼠視網膜血管是出生后開始生成，且視網膜表層血管和深層血管都是以視乳頭為中心向四周進行蔓延。表層血管在P10年齡點覆蓋整個視網膜，深層血管在P8時開始生長，至P14階段鋪滿視網膜，小鼠視網膜血管系統(tǒng)發(fā)育成熟。Reeler小鼠中 P0階段血管已經覆蓋了

4、整個視網膜，但成年小鼠視網膜中深層血管的分支與野生型相比明顯減少。隨著小鼠視網膜的發(fā)育， Reelin首先表達在神經節(jié)細胞和內網層，由此發(fā)出垂直分支向外網層延伸，至P14及成年，主要分布在神經節(jié)細胞層、內網層和外網層。（2）在 P0階段，上丘部位血管主干已經生成，垂直與上丘表面的軟腦膜且與軟腦膜中血管相連，隨著小鼠的發(fā)育上丘區(qū)血管逐漸密集。在上丘部位未見明顯的Reelin陽性染色但在P0至成年階段，GFAP在上丘帶狀層的有表達，大多緊貼

5、上丘軟腦膜血管。（3）在視皮層V1區(qū)P0階段已經生成放射狀主干血管，垂直于軟腦膜且與軟腦膜中血管相連。隨著皮層發(fā)育，血管分支越來越多，密度增大。放射狀星型膠質細胞多與血管伴行。在皮層發(fā)育過程中，Reelin蛋白主要表達在分子層，錐體細胞層和內顆粒層可見少量陽性染色。實驗結論：在視覺系統(tǒng)血管發(fā)育過程中，視網膜中的血管發(fā)育與Reelin的表達在時間與空間上有一定的相關性，參與調控小鼠視網膜中血管的有序性發(fā)育，而在上丘和視皮層中的相關性不大。

6、
　　第二部分：Reelin在成年鯽魚、牛蛙、家鴿和家兔等幾種脊椎動物視網膜中的表達。實驗目的：探究脊椎動物不同物種視網膜中Reelin和GFAP的表達情況。實驗方法：取成年野生鯽魚，牛蛙，家鴿和家兔視網膜，利用冰凍切片技術，進行HE染色和免疫熒光染色。實驗結果：（1）Reelin在成年野生鯽魚、牛蛙、家鴿和家兔的視網膜中均有表達。（2）GFAP在成年野生鯽魚、牛蛙和家兔視網膜中均有表達，但在家鴿視網膜中未見明顯陽性染色。實驗結論