瑞得狼毒藥物血清誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC-7712凋亡的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：測(cè)定瑞香狼毒藥物血清對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721生長的抑制作用以及對(duì)VEGF和Survivin表達(dá)的影響，探討其誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)用SMMC-7721作為瑞香狼毒藥物血清體外作用的模型，SMMC-7721，按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)，以不同濃度和不同時(shí)間采集的瑞香狼毒藥物血清處理SMMC-7721細(xì)胞24h和48h時(shí)，用MTT法觀察瑞香狼毒藥物血清對(duì)SMMC-7721的增殖抑制作用，用光學(xué)顯微

2、鏡觀察SMMC-7721的形態(tài)變化，用流式細(xì)胞儀觀察SMMC-7721細(xì)胞周期的變化，用Westem blot檢測(cè)瑞香狼毒藥物血清作用SMMC-7721細(xì)胞24h時(shí)SMMC-7721內(nèi)最小生存素和血管內(nèi)皮生長因子蛋白表達(dá)的改變。
　　 結(jié)果：瑞香狼毒藥物血清可明顯抑制SMMC-7721的增殖，這種抑制效應(yīng)在每個(gè)濃度2h采集的瑞香狼毒藥物血清作用最明顯，且在作用24h時(shí)與藥物濃度呈正相關(guān)，而在48h沒有顯示出明顯的劑量依賴性。

3、r>　　 光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)SMMC-7721在瑞香狼毒藥物血清作用下細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯變化，SMMC-7721出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，有凋亡小體形成。
　　 流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，瑞香狼毒藥物血清作用24h可明顯誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞被阻滯在G1期S期細(xì)胞減少，并且在2h采集的瑞香狼毒藥物血清作用更為明顯，表現(xiàn)出劑量依賴性，48h有此變化但效果不如24h明顯。
　　 以上三個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，2h采集的瑞香狼毒藥物血清藥效最好

4、并呈現(xiàn)出劑量依賴性，故進(jìn)行Western Blot實(shí)驗(yàn)時(shí)只是針對(duì)性地選擇了五個(gè)濃度，即3g／kg、6g／kg、9g／kg、12g／kg和對(duì)照組。結(jié)果顯示SMMC-7721中可以檢測(cè)到VEGF和Survivin蛋白的表達(dá)，說明瑞香狼毒藥物血清可以下調(diào)VEGF和Survivin蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)論：瑞香狼毒藥物血清能明顯抑制SMMC-7721增殖，表現(xiàn)出劑量依賴性，而且以2h采集的瑞香狼毒藥物血清作用最為明顯，瑞香狼毒藥物血清可