用于金黃色葡萄球菌與銅綠假單胞菌檢測的免標(biāo)記型電化學(xué)發(fā)光生物傳感器.pdf

1、基于電化學(xué)發(fā)光(ECL)的生物分析方法不僅保留了化學(xué)發(fā)光(CL)分析的諸多優(yōu)勢，還具有可控性強(qiáng)、重現(xiàn)性佳、選擇性好和可進(jìn)行原位檢測等特點(diǎn)?，F(xiàn)有的ECL生物分析方法多為傳統(tǒng)的探針標(biāo)記模式，其標(biāo)記過程耗時(shí)耗力，需要投入大量的人力成本和時(shí)間成本，并且在標(biāo)記過程中往往會(huì)使生物分子(例如抗體和酶)活性喪失，影響其分析效果。而免標(biāo)記型ECL生物傳感器由于避免了探針標(biāo)記，能夠提高ECL分析性能，因此開發(fā)一類避免傳統(tǒng)ECL標(biāo)記弊端和不足的免標(biāo)記型ECL

2、生物傳感器分析方法就顯得特別必要。故而，本文主要研究了用于金黃色葡萄球菌與銅綠假單胞菌檢測的兩種免標(biāo)記型ECL生物傳感器：
　　(1)基于免疫球蛋白G和Protein A特異性結(jié)合作用的金黃色葡萄球菌ECL生物傳感器
　　本文利用免疫球蛋白G(IgG)的Fc片段與金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁中的Protein A(SPA)的特異性結(jié)合作用，建立了一個(gè)用于檢測金黃色葡萄球菌的免標(biāo)記型ECL生物傳感器。由于羧基化石墨烯具有較大的比表面積

3、以及良好的電子傳輸能力，本研究將其與IgG進(jìn)行標(biāo)記然后再滴加在玻碳電極表面并用牛血清白蛋白(BSA)進(jìn)行封閉后制成ECL生物傳感器。由于SPA與IgG的Fc段的特異性結(jié)合作用，結(jié)合在生物傳感器上的金黃色葡萄球菌阻礙了ECL界面的電子傳遞以及ECL活性物質(zhì)的擴(kuò)散，結(jié)果導(dǎo)致ECL信號減小，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對金黃色葡萄球菌的定量分析。所得線性范圍為1.0×103-1.0×109CFU mL-1，檢測限為3.1×102CFU mL-1。當(dāng)使用研制的EC

4、L生物傳感器進(jìn)行金黃色葡萄球菌的檢測時(shí)，整個(gè)測定在70min內(nèi)即可完成。食品、環(huán)境樣品和生物樣品的加標(biāo)回收試驗(yàn)顯示本研究的回收率在75％-116.7%之間。該方法特異性好、操作簡便、制備簡單、分析時(shí)間短，為病原菌快速篩查提供了新的途徑。
　　(2)基于銅綠假單胞菌噬菌體特異性識(shí)別作用的銅綠假單胞菌ECL生物傳感器
　　本研究選用銅綠假單胞菌噬菌體(PaP1)特異性識(shí)別銅綠假單胞菌(PA1)的作用，建立了一個(gè)用于檢測PA1的免

5、標(biāo)記型ECL生物傳感器。由于羧基化石墨烯具有較大的比表面積以及良好的電子傳輸能力，本部分也選用羧基化石墨烯作為PaP1的載體，將其與PaP1進(jìn)行標(biāo)記然后滴加于玻碳電極表面并用BSA進(jìn)行封閉后制成ECL生物傳感器。由于PaP1對PA1的特異性識(shí)別作用，結(jié)合在ECL生物傳感器表面的PA1阻礙了ECL界面的電子傳遞以及ECL活性物質(zhì)的擴(kuò)散，結(jié)果導(dǎo)致ECL信號減小，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對PA1的定量分析。所得線性范圍為1.4×102-1.4×106CFU