工程菌發(fā)酵生產(chǎn)雞蛋清溶菌酶的工藝研究.pdf

1、溶菌酶(lysozyme)具有抗菌、消炎、抗病毒等作用，已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、輕工業(yè)及生物工程等生產(chǎn)領(lǐng)域。目前溶菌酶的生產(chǎn)方式主要是從雞蛋清中提取，分離成本高，限制了溶菌酶在畜禽等低附加值產(chǎn)業(yè)的應(yīng)用。因此，尋找一種新的溶菌酶生產(chǎn)方式迫在眉睫。
　　本課題采用山東大學(xué)構(gòu)建的一支甲醇誘導(dǎo)型重組畢赤酵母菌株NCY-2發(fā)酵表達雞蛋清溶菌酶(HEWL)。分別在搖瓶水平和10 L機械攪拌式生物反應(yīng)器水平研究了NCY-2菌株的最適生長和表達條

2、件，確定了HEWL在10 L反應(yīng)器水平的異源表達工藝。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　?。?）在搖瓶水平上，確定了適合NCY-2生長的BSM培養(yǎng)基四種主要組分的濃度：(NH4)2SO45.0 g/L、甘油30 g/L、CaSO40.93 g/L、PTM1(微量元素)4 mL/L；在此基礎(chǔ)上優(yōu)化了NCY-2的最適生長條件：pH值5.0，溫度30℃，接種量8％；最后在BMGY/BMMY培養(yǎng)基中，初步確定了NCY-2的最適表達條件：甲醇濃度

3、2%，誘導(dǎo)時間96 h，誘導(dǎo)溫度20℃，誘導(dǎo)pH3.5。
　?。?）在10 L生物反應(yīng)器水平上，以搖瓶實驗結(jié)果為基礎(chǔ)，通過甘油流加的方式，實現(xiàn)了菌株NCY-2的高密度培養(yǎng)，發(fā)酵液中的菌體干重可達到41.84 g/L，比原結(jié)果高出了1.3%，菌體生長時間縮短了3 h。
　　（3）在10 L生物反應(yīng)器水平上，按照上述高密度培養(yǎng)工藝，菌株NCY-2完成生長后，研究了甲醇流加對HEWL表達的影響，確定了該體系甲醇的流加方式：誘導(dǎo)開始