CTLA4-Ig和抗CD40L單抗對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎的影響.pdf

1、目的：研究CTLA4-Ig和抗CD40L單抗早期干預(yù)對(duì)T細(xì)胞活化的作用，探討阻斷CD28-B7、CD40-CD40L共刺激信號(hào)通路對(duì)自身免疫性心肌炎發(fā)生發(fā)展的影響及其機(jī)制。
　　 方法：60只Balb/C雄性小鼠隨機(jī)分成兩組：
　　 （1）實(shí)驗(yàn)組50只；于實(shí)驗(yàn)第1、8天給予皮下注射豬心肌肌球蛋白和CFA混合乳化液誘導(dǎo)制備EAM動(dòng)物模型，并進(jìn)一步分5個(gè)亞組：EAM對(duì)照組、CTLA4-Ig組、抗CD40L單抗組、聯(lián)合干預(yù)組及

2、IgG對(duì)照組，每組10只。CTLA4-Ig組、抗CD40L單抗組分別于初次免疫的第1、2、3天按1mg/kg體重小鼠尾靜脈注射CTLA4-Ig、抗CD40L單抗，聯(lián)合干預(yù)組等量注射兩者混合液，IgG對(duì)照組注射等量的小鼠IgG。
　　 （2）正常對(duì)照組10只；用PBS代替豬心肌肌球蛋白皮下注射。實(shí)驗(yàn)第21d眼球采血后留取心臟標(biāo)本，HE染色觀察心肌組織病理變化，血清Tn-I、CK-MB檢測(cè)反映心肌損傷情況，免疫組化及RQ-PCR檢測(cè)

3、心肌CTLA4、CD40L及其mRNA的表達(dá)，RQ-PCR法檢測(cè)心肌細(xì)胞因子IFN-γ及IL-4 mRNA表達(dá)變化，ELISA方法檢測(cè)血清IFN-γ、IL-4水平。
　　 結(jié)果：
　　 1．動(dòng)物生存情況 正常對(duì)照組皮下免疫過(guò)程中死亡1只，其余小鼠全部存活。EAM對(duì)照組與IgG對(duì)照組小鼠體重生長(zhǎng)緩慢，2-3W時(shí)甚至出現(xiàn)下降，其他各亞組體重?zé)o明顯差異。
　　 2．心肌組織病理改變 正常小鼠心肌細(xì)胞排列整齊，未見炎癥細(xì)

4、胞浸潤(rùn)。 EAM對(duì)照組與IgG對(duì)照組小鼠組呈急性心肌炎表現(xiàn)，心肌組織廣泛炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌細(xì)胞肥大變性，肌漿溶解斷裂，炎癥積分明顯高于正常對(duì)照組（P<0.01）。免疫干預(yù)后小鼠心肌炎癥浸潤(rùn)明顯好轉(zhuǎn)，炎癥積分降低，CTLA4-Ig組、抗CD40L單抗組見灶性、局限性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，聯(lián)合干預(yù)組僅見散在單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌炎癥積分低于單一干預(yù)組（P<0.05），兩單一干預(yù)組間無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　 3．血清心肌損傷標(biāo)志物檢測(cè)

5、 EAM對(duì)照組與IgG對(duì)照組小鼠血清Tn-I、 CK-MB水平顯著高于正常對(duì)照組（P<0.01）。免疫干預(yù)后，血清Tn-I、CK-MB水平下降，聯(lián)合干預(yù)組較單一干預(yù)組下降更為顯著（P<0.05），兩單一干預(yù)組間無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　 4．心肌組織 CTLA4、CD40L及其mRNA表達(dá) 免疫組化顯示EAM對(duì)照組及IgG對(duì)照組心肌廣泛浸潤(rùn)的單個(gè)核細(xì)胞胞膜高表達(dá)CTLA4、CD40L，RQ-PCR反映其mRNA也顯著升高

6、，與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。免疫干預(yù)后，CTLA4、CD40L蛋白及mRNA水平均下降，聯(lián)合干預(yù)組較單一干預(yù)組下降更為顯著（P<0.05），兩單一干預(yù)組間無(wú)明顯差異（P>0.05），CTLA4、CD40L在心肌中的表達(dá)強(qiáng)度與炎癥積分呈正相關(guān)。
　　 5．心肌細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4 mRNA表達(dá) EAM對(duì)照組及IgG對(duì)照組小鼠，心肌IFN-γmRNA、IL-4 mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組均明顯升高(P

7、<0.01)，以Th1細(xì)胞因子IFN-γmRNA升高更為顯著。兩單一干預(yù)組Th1細(xì)胞因子IFN-γmRNA表達(dá)降低，Th2細(xì)胞因子IL-4 mRNA表達(dá)升高，而聯(lián)合干預(yù)組IFN-γmRNA、IL-4 mRNA均明顯受到抑制，二者的表達(dá)都降低。
　　 6.血清IFN-γ、IL-4水平 EAM對(duì)照組及IgG對(duì)照組小鼠血清IFN-γ水平較正常對(duì)照組明顯升高（P<0.01），IL-4水平無(wú)明顯差異。免疫干預(yù)后，各干預(yù)組血清IFN-γ水平