擬南芥PPCl基因干涉表達(dá)調(diào)控油菜種子含油量研究.pdf

1、油菜(Brassica napus L.)是世界上第二大油料作物,菜籽油是繼大豆油、棕櫚油之后國(guó)際市場(chǎng)流通的第三大食用油。我國(guó)是世界油菜生產(chǎn)大國(guó),油菜種植面積和總產(chǎn)量均居世界首位。提高種子含油量一直是油菜育種家追求的一個(gè)重要目標(biāo),然而采用常規(guī)方法提高含油量的研究進(jìn)展比較緩慢,隨著植物基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展,通過(guò)轉(zhuǎn)基因的方法提高油菜籽的含油量愈來(lái)愈受重視。
　　 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)被認(rèn)為是控制蛋白質(zhì)／油脂含量比例的

2、一個(gè)關(guān)鍵酶,通過(guò)抑制PEPC基因的表達(dá)可以調(diào)節(jié)油脂和蛋白質(zhì)生物合成的共同底物PEP的流向,從而有望達(dá)到改變蛋白質(zhì)與油脂含量比率、提高含油量的目的。油菜與擬南芥同屬十字花科蕓薹屬植物且基因組同源性很高,因此來(lái)自擬南芥的基因通?？梢栽谟筒酥兄苯邮褂谩１狙芯繌臄M南芥中克隆PPC1基因片段,構(gòu)建成干涉表達(dá)載體后進(jìn)行了油菜轉(zhuǎn)化,主要結(jié)果如下:
　　 1.根據(jù)擬南芥PPC1基因序列設(shè)計(jì)引物,以擬南芥基因組DNA為模板擴(kuò)增出PPC1基因片段,

3、克隆至pMD18-T載體進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證后,以正向和反向連入質(zhì)粒pFGC-5941中構(gòu)建成由Napin啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的RNAi表達(dá)載體。
　　 2.通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化油菜品系CY2,獲得86株T0轉(zhuǎn)化植株,移栽到大田后成活41株。經(jīng)PCR檢測(cè)、Southern雜交和插入位點(diǎn)邊界序列分析確認(rèn)獲得21株轉(zhuǎn)基因植株。
　　 3.部分T1代轉(zhuǎn)化株系的遺傳分析表明,目標(biāo)基因大多為單位點(diǎn)和三位點(diǎn)插入,但也有一些株系屬于多位點(diǎn)整合。