不同含油量甘藍型油菜種子全蛋白及油體蛋白的雙向電泳分析.pdf

1、種子含油量作為生物學(xué)性狀指標(biāo),是油菜的主要經(jīng)濟學(xué)價值,油脂常以三酰甘油的形式儲存在油體中。提高含油量對我國油料作物供不應(yīng)求的形勢有重要意義。目前對含油量形成的分子機理了解的仍然較少。蛋白質(zhì)組學(xué)是研究種子含油量性狀的有效技術(shù)。本文首先建立了適合油體觀察的體系,并且分析了高、低含油量油菜種子油體形態(tài)特征。同時建立了適合甘藍型油菜種子全蛋白的雙向電泳方法。然后利用已建立的油菜種子全蛋白雙向電泳的方法對高、低含油量甘藍型油菜種子的油體蛋白進行雙

2、向電泳。并進一步利用軟件分別分析了高、低含油量甘藍型油菜種子蛋白質(zhì)的差異和高、低含油量種子中的油體蛋白的差異,為揭示高含油量形成的分子機理提供了理論基礎(chǔ),具有一定的意義。
　　 主要實驗結(jié)果如下:
　　 (1)建立了油體的觀察方法。采用石蠟切片方法以及尼羅紅染色和熒光顯微鏡觀察是對甘藍型油菜油體形態(tài)進行分析研究可行的方法。使用重鉻酸鉀固定液處理后的種子制作的石蠟切片可以得到細胞形態(tài)更加完整的切片。
　　 (2)利

3、用熒光顯微技術(shù)對油菜種子中的油體進行細胞、組織學(xué)觀察。首先在普通光源下對油體切片進行觀察發(fā)現(xiàn):高含油量油菜種子切片中細胞的內(nèi)含物排列緊密沒有空隙,表明高油中儲藏物質(zhì)較豐富;低含油量油菜種子切片中細胞細胞的內(nèi)含物較少,零星得分布在細胞中。汞燈光源下對油體切片進行觀察發(fā)現(xiàn):高含油量油菜種子切片細胞中的油體數(shù)量較多,油體經(jīng)尼羅紅著色后經(jīng)綠光激發(fā)后發(fā)出紅色熒光,明亮清晰:而低含油量油菜種子中油體較少,發(fā)出的紅色熒光較暗,整體切片熒光亮度較弱。經(jīng)

4、顯微形態(tài)計量分析,高、低含油量油菜種子的單位面積上的平均光密度值差異有統(tǒng)計學(xué)意義,因此本實驗方法可以作為比較油菜含油量高低的一種鑒別方法。
　　 (3)建立和優(yōu)化了基于管狀膠的雙向電泳體系。對不同含油量的甘藍型油菜種子全蛋白進行了雙向電泳的分離,獲得了兩者的蛋白表達圖譜,經(jīng)PDQuest8.01軟件分析,高、低含油量種子全蛋白的差異表達蛋白的有12個。
　　 (4)建立和優(yōu)化了適合油菜種子中油體蛋白的提取方法,利用此方法