肽修飾的甲氨蝶呤合成及體外抗腫瘤作用初步研究.pdf

1、目的：合成LH-RH肽修飾的甲氨蝶呤(LH-RH-MTX)并對(duì)其體外抗腫瘤作用進(jìn)行初步研究。
　　 方法：以APA為原料,與[D-Lys6]LH-RH共價(jià)連接合成LH-RH-MTX,采用ESI-MS、IR及1H-NMR進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。以LH-RH受體高表達(dá)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞及低表達(dá)的人紅白血病K562細(xì)胞作為受試細(xì)胞,分別采用MTT比色法檢測(cè)LH-RH-MTX對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用,流式細(xì)胞儀檢測(cè)LH-RH-MTX對(duì)細(xì)胞周期和

2、細(xì)胞凋亡的影響,免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)LH-RH-MTX對(duì)細(xì)胞LHRHR表達(dá)的影響,RT-PCR技術(shù)檢測(cè)LH-RH-MTX對(duì)細(xì)胞LHRHR mRNA表達(dá)量的影響。
　　 結(jié)果：合成產(chǎn)物L(fēng)H-RH-MTX為淡黃色結(jié)晶性粉末,產(chǎn)率為64.98％,熔點(diǎn)為165～166℃。采用ESI-MS、IR及1H-NMR進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證,產(chǎn)物分子量為1268.57,與理論值相符。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,LH-RH-MTX對(duì)MCF-7細(xì)胞的增殖抑制作用明顯高于

3、K562細(xì)胞;相同濃度的LH-RH-MTX對(duì)MCF-7細(xì)胞的增殖抑制作用明顯高于游離MTX。LH-RH-MTX對(duì)鼠骨髓單核細(xì)胞的抑制作用明顯小于游離MTX。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果顯示,經(jīng)LH-RH-MTX作用后,MCF-7細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)發(fā)生了變化,G0/G1期細(xì)胞明顯減少,S期細(xì)胞明顯增加。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示,LH-RH-MTX組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比明顯升高,而MTX組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)

4、果顯示,LH-RH-MTX組細(xì)胞陽(yáng)性率明顯低于對(duì)照組和MTX組。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,LH-RH-MTX組LHRHR mRNA的相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組相比明顯下降,而MTX組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。
　　 結(jié)論：MTX經(jīng)過(guò)LH-RH肽修飾之后,對(duì)LHRHR高表達(dá)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制作用明顯增強(qiáng),且對(duì)鼠骨髓單核細(xì)胞的抑制作用明顯降低;LH-RH-MTX對(duì)MCF-7細(xì)胞周期進(jìn)程有影響,主要作用于S期,并可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡