甲殼動物胰蛋白酶基因的研究.pdf

1、該文以中國對蝦(Penaeus chinensis)、日本對蝦(Penaeus japonicus)、克氏原螯蝦(Procambarus claikii)、口蝦蛄(Oratosquilla oratoria)和中華齒米蝦(Neocaridina denticulate sinensis)5種甲殼動物為研究對象,對其胰蛋白酶基因的基因組DNA片段進(jìn)行了克隆與序列分析.首先采用修改過的基因組DNA提取方法提取其基因組DNA,獲得的基因組DN

2、A純度高,質(zhì)量好,OD260/OD280比值均大于1.7.根據(jù)設(shè)計(jì)得到的簡并性PCR引物對基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,經(jīng)PCR產(chǎn)物純化,重組質(zhì)粒連接、轉(zhuǎn)化,藍(lán)百斑篩選等操作獲得了胰蛋白酶基因片段克隆.克隆結(jié)果經(jīng)測序后的序列分析表明,這些序列均與已報道的太平洋白蝦(Litopenaeus vannamei)胰蛋白酶基因有較高的相似度,序列中包含一個內(nèi)含子和兩個不完整的外顯子.對利用胰蛋白酶基因片段推斷出的氨基酸序列進(jìn)行的分析表明,它們與太

3、平洋白蝦等甲殼動物胰蛋白酶氨基酸序列相似度均在56﹪以上,與硬骨魚,雞,爪蟾,哺乳動物等脊椎動物胰蛋白酶序列也有較高的相似度,相似度在30﹪至50﹪之間.推測的氨基酸序列中具有胰蛋白酶所特有的His、Asp和Ser組成的活性三聯(lián)體、決定胰蛋白酶底物專一性的Asp、底物結(jié)合部位的Gly線基,及其它結(jié)構(gòu)上的保守區(qū)域,如可至少形成3個二硫鍵的8個Cys殘基.同時綜合多種檢測手段的檢測結(jié)果,我們可以推定這些序列就是這五種甲殼動物的胰蛋白酶基因序