大熊貓（Ailuropoda melanoleuca）下丘腦cDNA文庫的構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究以大熊貓的下丘腦組織為實驗材料,利用TRIzol試劑從大熊貓下丘腦組織抽提總RNA,獲得了5S、18S、28S三條帶比較明顯,純度高、質(zhì)量好且沒有降解的總RNA.用oligo(dT)-纖維素層析法從總RNA中成功純化出無二級結構的poly(A) <'+>mRNA.以mRNA為模板合成大小在100-500bp間的cDNA,獲得的cDNA通過Sepharose CL-2B樹脂柱按大小分級,回收cDNA大片段,然后將cDNA連接到Uni

2、-ZAP XR質(zhì)粒載體中,重組載體包裝上蛋白質(zhì)外殼,獲得了滴度為1.129×10<'6>clones/μg Uni-ZAP XR Vector的噬菌體cDNA初級文庫.噬菌體感染宿主菌并增殖,最終獲得庫容量為5.2×10<'9>pfu/ml、平均片段為300bp-500bp以上的擴增文庫.該研究為解決大熊貓繁殖力低、不易受孕、發(fā)情不易判斷等繁殖問題提供了一個重要的基因表達庫資源,并為進一步克隆研究與多種生命活動相關的基因提供了有力的手段

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