低氧誘導(dǎo)成骨細(xì)胞增殖分化兩種機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　1、探討低氧下，通過TLR-4信號通路高遷移率族蛋白B1(HMGB1)影響ERK/JNK磷酸化和成骨細(xì)胞分化增殖的機(jī)制，為臨床骨不連的治療提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)理論。
　　2、探討低氧下，通過NF-κB信號通路N-甲基吡咯烷酮(NMP)影響成骨細(xì)胞分化的機(jī)制，為N-甲基吡咯烷酮的臨床應(yīng)用提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　第一部分:
　　1.樣本的制備及分組
　　2.高遷移率族蛋白B1的酶聯(lián)

2、免疫吸附試驗
　　3.mRNA的提取和定量分析
　　4.免疫印跡實驗
　　5.CCK-8的細(xì)胞增殖實驗
　　第二部分:
　　1.細(xì)胞培養(yǎng)
　　2.酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測BMP-2，PINP, ALP和RUNX-2
　　3.利用RT-qPCR法檢測p65 mRNA，用熒光素酶報告實驗檢測NF-κB
　　4.蛋白分離和免疫印跡實驗
　　5.MTT法檢測細(xì)胞活力
　　結(jié)果：
　　

3、第一部分:
　　1.在低氧環(huán)境中骨折斷端血腫標(biāo)本、巨噬細(xì)胞U937中高遷移率族蛋白B1含量上調(diào)。
　　2.高遷移率族蛋白B1促進(jìn)成骨細(xì)胞MG-63增殖并且上調(diào)TLR-4。
　　3.高遷移率族蛋白B1誘導(dǎo)MG-63細(xì)胞中ERK和JNK的磷酸化。
　　4.MG-63細(xì)胞TLR-4低表達(dá)后可以抑制高遷移率族蛋白B1促進(jìn)MG-63細(xì)胞增殖的作用。
　　5.TLR-4低表達(dá)后降低了MG-63細(xì)胞中，高遷移率族蛋白B1

4、-誘導(dǎo)的ERK和JNK磷酸化。
　　第二部分:
　　1.低氧誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化標(biāo)志蛋白下調(diào)
　　2.低氧誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞去分化激活NF-κB信號
　　3.N-甲基吡咯烷酮影響低氧誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化
　　4.低氧下，N-甲基吡咯烷酮通過抑制NF-κB信號通路來調(diào)節(jié)hFOB1.19細(xì)胞的分化。
　　結(jié)論：
　　1.在低氧環(huán)境中骨折斷端血腫標(biāo)本、巨噬細(xì)胞U937中高遷移率族蛋白B1含量上調(diào)
　　2.

5、高遷移率族蛋白B1促進(jìn)成骨細(xì)胞MG-63增殖并且上調(diào)TLR-4
　　3.高遷移率族蛋白B1誘導(dǎo)MG-63細(xì)胞中ERK和JNK的磷酸化
　　4.MG-63細(xì)胞TLR-4低表達(dá)后可以抑制高遷移率族蛋白B1促進(jìn)MG-63細(xì)胞增殖的作用
　　5.TLR-4低表達(dá)降低了MG-63細(xì)胞中高遷移率族蛋白B1-誘導(dǎo)的ERK和JNK磷酸化
　　6.低氧誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化標(biāo)志骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2、骨膠原前肽Ⅰ，堿性磷酸酶和RUNX2蛋白