內(nèi)生真菌抗性菌株的篩選及人工共生體的構(gòu)建.pdf

1、大量的研究表明內(nèi)生真菌能夠提高宿主禾草抗生物干擾和非生物脅迫的能力。目前廣泛使用的很多草坪草種以及自然生態(tài)系統(tǒng)中的天然禾草都不含內(nèi)生真菌，如能篩選到具優(yōu)良性狀的內(nèi)生真菌，并通過人工轉(zhuǎn)接的方法將其轉(zhuǎn)接到非天然宿主中，以提高非天然宿主的抗逆性，這對(duì)牧草的改良和草坪草的管理具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本文從禾草-內(nèi)生真菌共生體和體外單獨(dú)培養(yǎng)的內(nèi)生真菌兩方面進(jìn)行抗性篩選，以期得到具有優(yōu)良性狀的菌株用于人工轉(zhuǎn)接，同時(shí)采用多種方法人工構(gòu)建禾草-內(nèi)生真菌共生

2、體。 本研究從抗旱性和病原真菌抗性兩方面進(jìn)行篩選。其中抗旱性篩選分別在種子、幼苗以及體外培養(yǎng)的內(nèi)生真菌3個(gè)水平上進(jìn)行；病原真菌的抗性篩選只對(duì)體外培養(yǎng)的內(nèi)生真菌進(jìn)行。 首先對(duì)黑麥草、高羊茅和羽茅的7個(gè)品種的種子進(jìn)行抗旱性篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有供試種子的發(fā)芽勢對(duì)干旱脅迫比發(fā)芽率更敏感；不同植物種子的發(fā)芽特性存在很大的差異，高羊茅Millennium染菌種子在各脅迫處理下都能保持較高的發(fā)芽勢和發(fā)芽率。 將從種子發(fā)芽上表現(xiàn)出

3、一定優(yōu)勢的種子用于幼苗實(shí)驗(yàn)，在溫室中用PEG模擬干旱脅迫，比較了內(nèi)生真菌感染(EI)和非感染(EF)的高羊茅Millennium種群的幾項(xiàng)與水分生理相關(guān)的指標(biāo)。結(jié)果表明在對(duì)照和輕度脅迫時(shí)，EI植株的分蘗、葉長、滲透勢、游離脯氨酸含量及生物量與EF種群相比都沒有顯著差異；重度脅迫條件下，復(fù)水后EI植株葉片展開程度明顯大于EF植株，根系活力顯著高于EF植株(P＜0.05)，說明重度干旱脅迫下內(nèi)生真菌感染對(duì)高羊茅的恢復(fù)生長有一定的增益作用。

4、 在對(duì)共生體篩選的同時(shí)對(duì)內(nèi)生真菌本身的抗旱性進(jìn)行了篩選，將從黑麥草、高羊茅和羽茅中分離的內(nèi)生真菌Y、P、Ju、S、M、R，用YM培養(yǎng)基進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，比較它們?cè)诓煌瑵舛鹊腜EG干旱脅迫下的菌絲干重，發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌本身對(duì)干旱脅迫的抗性依次是Y＞P＞Ju＞S＞M＞R。 病原真菌抗性篩選：通過體外培養(yǎng)，比較了幾種禾草內(nèi)生真菌(YM，Ju)對(duì)草坪草病原真菌鐮刀菌屬、立枯絲核屬、枝孢霉屬、擬莖點(diǎn)屬、彎孢霉屬的抑制作用。結(jié)果表明從羽茅中分

5、離的內(nèi)生真菌Y對(duì)枝孢霉屬、彎孢霉屬和擬莖點(diǎn)屬拮抗作用比較明顯，對(duì)峙培養(yǎng)3天后的抑菌率分別達(dá)70.1％、52.3％和30.9％，營養(yǎng)競爭作用、重寄生作用是其主要的拮抗機(jī)制。從高羊茅中分離的內(nèi)生真菌M對(duì)枝孢霉屬真菌存在一定的抑制作用，而從黑麥草中分離的Ju對(duì)供試的5種病原菌都沒有明顯的抑制作用。因此推斷Y對(duì)病原菌的拮抗效果優(yōu)于M和Ju，可作為草坪草生物防治的拮抗菌。 人工轉(zhuǎn)接方面：分別采用了無菌幼苗轉(zhuǎn)接、幼苗轉(zhuǎn)接、成株分蘗轉(zhuǎn)接及愈傷