海參自溶酶的純化和性質(zhì)研究.pdf

1、大連輕工業(yè)學(xué)院碩士學(xué)位論文海參自溶酶的純化和性質(zhì)研究姓名：韓冰申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：食品科學(xué)指導(dǎo)教師：朱蓓薇20040401A b s t r a c tH o l o t h u r i a nI S o n ek i n do fe c h i n o d e r m so ft h ec l a s sH o l o t h u r i o d e a ．F r e s h h o l o t h u r i a nc a nb

2、 eh y d r o l y z e du n d e rs o m e c o n d i t i o n sd u e t ot h ef u n c t i o no f a u t o e n z y m ew i t h i ni t sb o d yW e c a n a v o i de x c e s s i v e “p o l l u t i o n ’’f r o me x t r a n e o u se n

3、z y m ei ft h eh o l o t h u r i a n sa u t o e n z y l n ec a l lb ee x t r a c t e da n d u s e df o rt h ep r e p a r ￡t t i o no f p o l y p e p t i d e ，a m i n o p h e n o lo ra c t i v es u b s t a n c eI t i so f

4、 g r e a ts i g n i f i c a n c et or e s e a r c ho nh o l o t h u r i a n sa u t o e n z y m e ．I nt h i sp a p e r ，t h ee f f e c t i v em e t h o d s o f p u r i f i c a t i o na n d p a r t i a lc h a r a c t e r s

5、w e r e s t u d i e da c c o r d i n g t ot h es p e c i f i cc h a r a c t e ro f t h eh o l o t h u r i a n sa u t o e n z y m e ．T h er a wh o l o t h u r i a n sa u t o e n z y mw a sp r o p e r l ya c q u i r e df r

6、 o mt h ep u r i f i c a t i o no fs a l i n ce x t r a c t i o n a m m o n i u m s u l f a t e p r e c i p i t a t i o n a n d e t h a n o l p r e c i p i t a t e e x t r a c t i o n o f f r o z e nh o l o t h u r i a n

7、 si n t e s t i n e s e x t r a c t e db yp h o s p h a t eb u f f e r ．F r o mt h ec o m p a r i s o no ft h ee n z y m ea c t i v i t y a n d c o m p o s i t i o n ，s a l i n e e x t r a c t i o n w a s f o u n d t o b

8、 e a b e t t e r w a y ．W i t h t h ec h r o m a t o g r a p h y o n D E A E —c e l l u l o s e a n d S e p h a d e x - 1 0 0 c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y ，t h eh o l o t h u r i a n sa u t o e n z y m w a s a

9、 c q u i r e d w i t h e x t r e m e p u r i f i c a t i o n ．T h eo p t i m u me x t r a c t i o nc o n d i t i o no f s a l i n ee x t r a c t i o na m m o n i u ms u l f a t ep r e c i p i t a t i o nw a s c l a r i f

10、 i e d ．T h eo p t i m u mp Hv a l u ea n di o n i cc o n c e n t r a t i o no ft h ep h o s p h a t eb u f f e rw a sp H 6 ．3a n dO ．2 m o l ／Lr e s p e c t i v e l y ．T h es a t u r a t i o n so f t h es a l i n ee x t

11、 r a c t i o na m m o n i u ms u l f a t ep r e c i p i t a t i o nw a s 2 0 ％a n d 7 0 ％i n e a c hs t e po r d e r l y ．T h e e x p e r i m e n t r e s u l t si n d i c a t e dt h a tt h eh o t o t h u r i a n sa u t o

12、 e n z y m w a so n e k i n do f a c i d i cp r o t e a s e ，t h em o l e c u l a r w e i g h tw a s a b o u t 6 8 ．5k D a ，a n d t h eo p t i m a lt e m p e r a t u r ea n d p H v a l u eo ft h ee n z y m ew e r e3 5 ℃a

13、 n d 7r e s p e c t i v e l y ．I t sc a t a l y t i ca c t i v i t yW a s n o ts t a b l eu n d e rh e a tt r e a t m e n t ．T h eh o l o t h u r i a n sa u t o e n z y m w a s i n h i b i t e db y t h e m e t a li o n s

14、i n c l u d i n gP b ”、H 礦+ 、C d 2 ’、M n 2 + a n d a c t i v a t e dw i t h a d d i t i o no f Z n 2 + 、M 9 2 + 、C u 2 + i n v a r y i n gd e g r e e s ．K e y w o r d s ：h o I o t h u r i a n s a u t o e n z y m e ：a m m