生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞.pdf

1、目的：建立兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)體外分離培養(yǎng)的方法，并進(jìn)一步研究其在旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器(rotatingwallvesselbioreactor，RWV)內(nèi)結(jié)合微載體培養(yǎng)技術(shù)實(shí)現(xiàn)大規(guī)模培養(yǎng)的條件。 方法：取3-14周齡的新西蘭大白兔，分別采用全骨髓培養(yǎng)法和密度梯度離心法這兩種方法在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并觀察細(xì)胞形態(tài)特征、繪制生長曲線、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面分子及向成骨

2、細(xì)胞誘導(dǎo)；利用微載體培養(yǎng)法在旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器內(nèi)大規(guī)模擴(kuò)增兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，檢測其組織形態(tài)及生物功能，并與靜態(tài)培養(yǎng)作比較。 結(jié)果：對于4-7周齡的新西蘭大白兔，采用密度梯度離心法分離得到的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在4-7代時細(xì)胞形態(tài)好，增殖能力強(qiáng)，適合作進(jìn)一步研究用。細(xì)胞接種密度為1×105cells/ml、Cytodex-3微載體濃度為10mg/ml時，兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器中培養(yǎng)5天，細(xì)胞數(shù)達(dá)到最大，可擴(kuò)增近10倍

3、，而應(yīng)用微載體技術(shù)在靜態(tài)培養(yǎng)時只能擴(kuò)增近4倍。同時對靜態(tài)和動態(tài)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)、pH值、滲透壓、葡萄糖、乳酸、流式檢測及向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器中培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞時，培養(yǎng)基的pH值在7.4-7.6之間，滲透壓變化不大，與細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)比較可見葡萄糖含量低而乳酸含量高。 結(jié)論：采用密度梯度離心法成功建立了兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)體系，而新型旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器可以為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外大規(guī)模擴(kuò)增提供