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1、本實(shí)驗(yàn)以小麥(TriticumaestivumL.)溫敏核雄性不育系BS210為材料,在北京和安徽阜陽(yáng)種植,分三個(gè)階段進(jìn)行小麥穗部取樣:雌雄蕊原基分化期—藥隔形成期,藥隔形成期—四分體期,四分體期—單核前期,選用錨定引物和8種隨機(jī)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,從mRNA差異顯示電泳圖譜中,選擇差異cDNA片段進(jìn)行反向Northern斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證,并克隆陽(yáng)性片斷。通過(guò)分析不同時(shí)期兩種環(huán)境中基因的表達(dá)情況,從中初步篩選出峰圖良好和插入片段長(zhǎng)度大于20
2、0bp的序列。并采用BLASTX及BLASTN對(duì)18個(gè)EST序列進(jìn)行了對(duì)比分析,對(duì)比結(jié)果表明:其中三個(gè)基因片段與已知序列同源性較高,小麥穗發(fā)育過(guò)程中類激酶受體基因、玉米細(xì)胞死亡抑制蛋白基因和一粒小麥磷脂酰絲氨酸脫羧酶基因高度同源,分別為92%、70%和89%,其余14個(gè)序列為新基因片斷。該研究為以后獲取相關(guān)基因提供了重要的序列信息,為分子水平上探討雄性不育機(jī)理奠定了研究基礎(chǔ)。 以不育系BS210和BS366作母本,63個(gè)常規(guī)品種
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