miR-103a-3對PANC-1細(xì)胞增殖與遷移侵襲能力的影響.pdf

1、目的：胰腺癌是具有高侵襲轉(zhuǎn)移生物學(xué)特征的消化道腫瘤之一，而胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移等過程與miRNA密切相關(guān)。本課題組前期通過應(yīng)用 qRT-PCR檢測 miR-103a-3p在胰腺癌細(xì)胞株中表達(dá)明顯增高，并通過構(gòu)建其抑制表達(dá)的慢病毒感染PANC-1細(xì)胞從而獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株[1]。本研究旨在細(xì)胞層面了解miR-103a-3p對PANC-1胰腺癌細(xì)胞增殖與遷移侵襲能力的影響，并為下一步的動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及靶基因機(jī)制及其信號通路的研究提供

2、實(shí)驗(yàn)及理論基礎(chǔ)。
　　方法：1、選取課題組前期PANC-1細(xì)胞株作為研究對象，將課題組前期構(gòu)建好的抑制miR-103a-3p表達(dá)的慢病毒載體分別取1ul、5ul、10ul、20ul和空病毒載體分別轉(zhuǎn)染PANC-1細(xì)胞株。2、利用熒光顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)染效率，再通過qRT-PCR檢測其表達(dá)情況，并篩選出miR-103a-3p表達(dá)量最低的一組慢病毒轉(zhuǎn)染的PANC-1細(xì)胞株和空病毒轉(zhuǎn)染的PANC-1細(xì)胞株。3、將篩選出來的PANC-1細(xì)胞株

3、分為三組：1）抑制 miR-103a-3p表達(dá)的慢病毒載體感染的PANC-1組（control-PANC-1）；2）空病毒載體感染的PANC-1細(xì)胞株（NC-PANC-1）；3）胰腺癌細(xì)胞組（PANC-1）。4、MTT法檢測三組細(xì)胞株的增殖能力；5、劃痕愈合試驗(yàn)檢測三組細(xì)胞株的遷移能力；6、Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測三組細(xì)胞株的侵襲能力。
　　結(jié)果：1）將miR-103a-3p-inhibitor慢病毒和空病毒載體轉(zhuǎn)染PANC

4、-1細(xì)胞株后觀察其轉(zhuǎn)染效率，通過qRT-PCR檢測后篩選miR-103a-3p表達(dá)量最低的PANC-1細(xì)胞株。2）MTT法檢測結(jié)果顯示：與空白組和NC-PANC-1相比，control-PANC-1組的PANC-1細(xì)胞數(shù)明顯減少
　?。≒<0.05），并且隨著培養(yǎng)時(shí)間延長，control-PANC-1組細(xì)胞數(shù)量增長幅度比PANC-1組和NC-PANC-1組逐漸減弱。3）劃痕愈合試驗(yàn)結(jié)果顯示：下調(diào)miR-103a-3p表達(dá)量的con