ERK5調(diào)控血小板膜蛋白GPIb-IX受體介導(dǎo)血小板活化的機(jī)制研究.pdf

1、血小板是由巨核細(xì)胞發(fā)育成熟后細(xì)胞質(zhì)脫落形成的無(wú)核細(xì)胞，其在血栓與止血、炎癥、腫瘤轉(zhuǎn)移和血管生成等病理生理過(guò)程中有著重要的作用。血小板的異?；罨梢詫?dǎo)致包括動(dòng)脈血栓（心肌梗死），靜脈血栓（深靜脈血栓）和微血管血栓（DIC）在內(nèi)的血栓性疾病，嚴(yán)重威脅著生命健康。血小板糖蛋白GPIb-IX復(fù)合物及其傳導(dǎo)的信號(hào)在血小板的粘附，聚集和活化中起到關(guān)鍵作用。GPIb-IX信號(hào)傳導(dǎo)包括Src，PI3K，MAPKs和多種放大機(jī)制。MAPKs中的p38和E

2、RK1/2已被證明是GPIb-IX介導(dǎo)的血小板粘附和聚集的關(guān)鍵蛋白，但另一成員ERK5在GPIb-IX介導(dǎo)的血小板活化中的功能仍然未知。為此進(jìn)行了ERK5參與GPIb-IX介導(dǎo)血小板活化的機(jī)制研究。
　　目的：研究ERK5在GPIb-IX介導(dǎo)的血小板活化中的功能。
　　方法：評(píng)估ERK5抑制劑XMD8-92對(duì)botrocetin/VWF或ristocetin/VWF誘導(dǎo)血小板兩相聚集和高剪切力作用下血小板粘附到VWF的影響。

3、通過(guò)血小板免疫共沉淀，質(zhì)譜分析和western印跡來(lái)鑒定ERK5的結(jié)合蛋白。通過(guò)特異性抑制劑和western印跡來(lái)明確ERK5及其結(jié)合蛋白在GPIb-IX介導(dǎo)的血小板活化中的作用。
　　結(jié)果：在被botrocetin/VWF或ristocetin/VWF刺激的人血小板中，ERK5的磷酸化水平顯著增強(qiáng)。ERK5抑制劑XMD8-92能顯著抑制botrocetin/VWF或ristocetin/VWF誘導(dǎo)的人血小板聚集的第二相。同時(shí)，X

4、MD8-92抑制了高剪切力作用下血小板粘附到VWF的程度。免疫沉淀和質(zhì)譜分析顯示ERK5與CKII結(jié)合。XMD8-92和CKII的抑制劑TBB能特異性地抑制PTEN的磷酸化，進(jìn)而抑制血小板中Akt的磷酸化。結(jié)論：ERK5與CKII結(jié)合，通過(guò)PTEN/PI3K/Akt通路調(diào)控GPIb-IX介導(dǎo)的血小板活化。
　　結(jié)論：ERK5的激活在血小板中是激動(dòng)劑特異性的。ERK5抑制劑XMD8-92也用于檢測(cè)對(duì)其他血小板激動(dòng)劑例如膠原(coll