HO-1、SOD2和Mfn2在實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠中的表達及丁苯酞保護作用的研究.pdf

1、目的:多發(fā)性硬化(Multiple Sclerosis，MS)是一種累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的慢性炎性脫髓鞘性疾病，其發(fā)病機制尚不明確。研究表明，氧化應(yīng)激和線粒體損傷在MS的發(fā)病機制中起重要作用。本實驗研究不同劑量丁苯酞對實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE)小鼠脊髓組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)HO-1和線粒體損傷標(biāo)志物SOD2、Mfn2表達水平的影響。初步探討丁苯酞

2、對EAE小鼠神經(jīng)功能障礙的保護作用及其可能的作用機制。
　　方法:C57BL/6小鼠使用MOG35-55作為抗原免疫建立EAE模型。以神經(jīng)功能評分2分及以上為模型成功，隨機分為低劑量NBP組、高劑量NBP組、地塞米松組和EAE組，并設(shè)正常對照組。低劑量NBP組(LDN)、高劑量NBP組(HDN)小鼠分別腹腔注射丁苯酞80mg/kg/d、120mg/kg/d。地塞米松組(DXM)小鼠給予地塞米松磷酸鈉注射液0.07mg/kg/d腹腔

3、注射;正常對照組及EAE組小鼠每日腹腔注射等體積DMSO，共14天。分別于發(fā)病后第0天、第7天及第14天三個時間點觀察C57BL/6小鼠自免疫后的精神狀態(tài)、活動情況、發(fā)病情況及神經(jīng)功能評分。隨后處死小鼠取脊髓組織，以HE染色在光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠脊髓炎癥細胞的浸潤情況;以免疫組化方法觀察小鼠脊髓腰膨大部位HO-1、SOD2及Mfn2的表達情況;黃嘌呤氧化法測定血清SOD的濃度;使用qRT-PCR方法測定小鼠脊髓腰膨大部位HO-1 mRN

4、A、SOD2mRNA以及Mfn2mRNA的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1、各組小鼠臨床表現(xiàn)觀察:正常對照組小鼠在整個實驗中均正常，且體重逐漸增加。EAE組小鼠抗原免疫后出現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、體重下降等表現(xiàn)。EAE組小鼠發(fā)病達高峰期時癥狀最嚴重，小鼠出現(xiàn)背部潰瘍、四肢癱瘓及大小便失禁。低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組小鼠發(fā)病給予藥物治療后，與EAE組小鼠比較，體重下降程度較輕，臨床癥狀表現(xiàn)相對較輕。
　　2、

5、神經(jīng)功能評分比較:計算各組中每只小鼠的最高神經(jīng)功能評分的均數(shù)，并進行比較。EAE組小鼠神經(jīng)功能評分高于低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）。高劑量NBP組神經(jīng)功能評分明顯低于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組小鼠神經(jīng)功能評分相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3、各組小鼠脊髓組織HO-1表達情況比較:分別于后第0天、第7天及第14天時，EAE組、低劑量

6、NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組與對照組相比，小鼠脊髓組織HO-1 mRNA表達水平、HO-1陽性細胞數(shù)明顯增多，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。于發(fā)病高峰期及緩解期小鼠脊髓組織中，低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組上述指標(biāo)高于EAE組（P＜0.05）;高劑量NBP組上述指標(biāo)明顯高于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組上述指標(biāo)相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

7、　　4、各組小鼠脊髓組織SOD2表達情況比較:分別于后第0天、第7天及第14天時，EAE組、低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組與對照組相比，小鼠脊髓組織SOD2mRNA表達水平、SOD2陽性細胞數(shù)明顯減少，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。于發(fā)病高峰期及緩解期小鼠脊髓組織中，低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組上述指標(biāo)高于EAE組（P＜0.05）;高劑量NBP組上述指標(biāo)明顯高于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜

8、0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組上述指標(biāo)相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　5、各組小鼠脊髓組織Mfn2表達情況比較:分別于后第0天、第7天及第14天時，EAE組、低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組與對照組相比，小鼠脊髓組織Mfn2mRNA表達水平、Mfn2陽性細胞數(shù)明顯減少，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜O.05)。于發(fā)病高峰期及緩解期小鼠脊髓組織中，低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組上述指標(biāo)高于E

9、AE組（P＜0.05）;高劑量NBP組上述指標(biāo)明顯高于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組上述指標(biāo)相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6、血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量比較:分別于后第0天、第7天及第14天時，EAE組、低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組與對照組相比，小鼠血清SOD濃度明顯增多，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。低劑量NBP組、高劑量NBP組及

10、地塞米松組小鼠血清SOD濃度高于EAE組（P＜0.05）;高劑量NBP組小鼠血清SOD濃度明顯高于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組小鼠血清SOD濃度相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、EAE發(fā)病早期就出現(xiàn)線粒體的損傷，丁苯酞與地塞米松均能降低EAE小鼠的神經(jīng)功能障礙。
　　2、丁苯酞對于EAE小鼠神經(jīng)功能缺失的保護作用存在劑量效應(yīng)，大劑量丁苯酞