金納米粒子對PCR特異性擴(kuò)增的效應(yīng)及ACC的液相色譜測定.pdf

1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)又稱體外擴(kuò)增技術(shù)，是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究的常用的重要手段。在過去的幾十年，PCR技術(shù)在分子遺傳學(xué)取得革命性的突破，廣泛用于分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。鑒于PCR產(chǎn)物累積呈幾何級數(shù)增長的特性，PCR技術(shù)具有較高的靈敏性，擴(kuò)增條帶可用于DNA序列分析、分子診斷和遺傳分析，然而PCR非特異性擴(kuò)增限制了PCR技術(shù)的發(fā)展。最近，人們試圖從新興學(xué)科與技術(shù)中尋找優(yōu)化PCR的方法。納米

2、科學(xué)技術(shù)和生物科學(xué)技術(shù)相結(jié)合的納米生物技術(shù)由于其獨(dú)特的優(yōu)勢性越來越引起人們的關(guān)注。金納米粒子的粒徑尺寸約幾納米到幾十納米左右，穩(wěn)定性好，而且具有良好的生物相容性、獨(dú)特的光電性質(zhì)，在生物領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。近幾年已有相關(guān)文獻(xiàn)報道，金納米粒子或量子點(diǎn)能夠減少PCR的非特異性擴(kuò)增，使特異性擴(kuò)增得到增強(qiáng)。但是研究僅限于金納米粒子在短鏈目的條帶(小于1000bp)不同鏈長DNA的特異性擴(kuò)增的影響，而對長鏈目的條帶(大于1000bp)的影響還未見報道

3、，基于此，我們探索了金納米粒子對PCR長鏈產(chǎn)物1100bp和2500bp的特異性擴(kuò)增影響。
　　 乙烯是調(diào)節(jié)植物生長、發(fā)育和衰老的主要植物激素。植物通過一系列基因的表達(dá)，最后由乙烯調(diào)控水果的成熟，所以說研究乙烯含量的變化在農(nóng)業(yè)方面具有重要的生理學(xué)意義。1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸是乙烯生物合成的直接前體，與植物體內(nèi)一系列生理變化反應(yīng)關(guān)系密切，所以研究植物組織或器官ACC的含量可以更好的理解乙烯在植物生理學(xué)上的調(diào)控機(jī)制。植物體內(nèi)ACC

4、含量的測定一般通過NaClO·飽和的NaOH溶液氧化，但是這種方法存在轉(zhuǎn)化率低且不確定、樣品消耗量大等缺點(diǎn)，因此本文詳細(xì)描述了以HPLC為基礎(chǔ)，結(jié)合熒光檢測器，建立了一種簡便、快速和直接測定植物組織中微量ACC含量的新方法。
　　 該方法是基于用熒光胺作為柱前衍生化試劑，在pH=8.0的硼酸緩沖溶液中反應(yīng)，產(chǎn)生強(qiáng)熒光性的產(chǎn)物。各種影響衍生化反應(yīng)效率的實(shí)驗(yàn)條件通過熒光分光光度法優(yōu)化得到。對于實(shí)際樣品的檢測，桃和蘋果中提取得到的AC

5、C沒有進(jìn)行進(jìn)一步的純化，其衍生化產(chǎn)物通過高效液相色譜C18柱結(jié)合熒光檢測器成功分離。在檢測ACC時，其他存在果實(shí)中可能干擾ACC檢測的多種氨基酸在本實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行了研究，能夠很好和ACC色譜峰分開，不會影響ACC的檢測。在ACC濃度為橫坐標(biāo)(濃度范圍23.82-238.82μg·L-1)和衍生物色譜峰積分面積為縱坐標(biāo)時，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)性很好，相關(guān)系數(shù)為0.9997。在信噪比為3時，計(jì)算得到其最低檢測限為5.0μg·L-1。本實(shí)驗(yàn)方法