鯽卵源致病性水霉的分離與鑒定及其生物學特性研究.pdf

1、魚類人工繁殖孵化過程中，水霉病危害很嚴重，常常造成重大經(jīng)濟損失，尋找合適的防治水霉病的方法具有重要意義。本文從病原入手，在患有水霉病的鯽卵上分離一株致病性菌株JL1，通過形態(tài)學和分子生物學形結(jié)合的方法對其進行了鑒定，然后研究了病原與藥物的相互作用，即菌株JL1不同發(fā)育階段對3種藥物的敏感性，最后從3種藥物中選取對菌株JL1作用效果較好的成分制成制劑，研究了制劑對魚卵水霉病的防治效果。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.鯽卵水霉病病原的

2、分離與鑒定
　　 從患病的彭澤鯽卵上分離3株絲狀菌，經(jīng)人工感染試驗證實其中一株絲狀菌JL1對彭澤鯽卵具有致病性，并進一步研究了其形態(tài)特征，開展了ITSrDNA序列分析。實驗結(jié)果表明，菌株JL1菌絲為透明管狀結(jié)構(gòu)，中間無橫隔，分枝較少；游動孢子囊多數(shù)呈棒狀，游動孢子呈多排排列，發(fā)育成熟后從孢子囊中釋放出來，并迅速游離；藏卵器呈球形，與雄器同枝或異枝。菌株JL1的ITSrDNA序列與GenBank基因庫中水霉屬菌株自然聚類，同源性高

3、達99％，與異枝水霉S.diclina、多子水霉S.ferax、長莖水霉S.longicaulis的親緣關(guān)系較近。結(jié)合形態(tài)特征與ITS序列鑒定的結(jié)果，判定菌株JL1為水霉菌(Saprolegniasp.)。
　　 2.菌株JL1的生長特性及溫度和營養(yǎng)對游動孢子產(chǎn)生及萌發(fā)的影響
　　 試驗結(jié)果顯示：菌株JL1在5℃-30℃、pH4-11范圍內(nèi)均能生長，最適生長溫度和pH范圍分別為25℃-30℃和6-9。同時菌株JL1對氯化

4、鈉敏感，質(zhì)量分數(shù)為2％NaCl即可抑制其生長，可以作為該病防治的依據(jù)。菌株JL1在15℃-30℃均能產(chǎn)生游動孢子，35℃時由于菌絲生長受到抑制而不能產(chǎn)生游動孢子，最適溫度范圍在20℃-25℃；25℃時在水中培養(yǎng)36h后，游動孢子產(chǎn)生的量最大；20℃時培養(yǎng)48h，游動孢子的量達到最大。菌株JL1游動孢子在15℃-30℃能萌發(fā)，35℃條件下不能萌發(fā)，最適溫度范圍為20℃-25℃。菌株JL1在營養(yǎng)豐富的條件下，菌絲生長旺盛，但不產(chǎn)生游動孢子，

5、同時豐富的營養(yǎng)能促進游動孢子萌發(fā)。
　　 3.菌株JL1不同發(fā)育階段對3種藥物的敏感性
　　 3種抗水霉藥物對菌株JL1不同發(fā)育階段的試驗結(jié)果顯示：水霉孢子比菌絲對3種藥物更敏感。其中化合物H對菌株JL1菌絲生長、孢子囊形成、游動孢子釋放、游動及萌發(fā)等5個階段的有效抑制濃度分別為10mg/L、5mg/L、10mg/L、2.5mg/L、5mg/L。土槿皮提取物對菌株JL1不同發(fā)育階段的有效抑制濃度分別為5mg/mL、1mg

6、/mL、5mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL。MBT對菌株JL1菌絲生長、孢子囊形成、游動孢子釋放和萌發(fā)的有效抑制濃度分別為1mg/L、0.5mg/L、1mg/L、0.5mg/L，對游動孢子游動的抑制作用較弱。
　　 4、藥物對魚卵水霉病的防治試驗
　　 從效果、安全、成本、加工工藝等綜合考慮，選取化合物H作為抗水霉藥物的主要成分，添加適當?shù)脑鲂?、填充劑、分散劑等成分，制成化合物H制劑?；衔颒制劑對鯽卵胚胎發(fā)