脂聯(lián)素預(yù)處理對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注膽管損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、研究目的:脂聯(lián)素是主要由脂肪細(xì)胞分泌的特異性蛋白，具有抗糖尿病特性。最近有研究發(fā)現(xiàn)其參與炎癥反應(yīng)，并且在心臟、腎臟缺血再灌注損傷中得到印證。但是對(duì)于脂聯(lián)素在肝缺血再灌注膽道損傷作用相關(guān)報(bào)道很少。本研究觀察脂聯(lián)素在肝臟熱缺血再灌注膽管損傷的保護(hù)作用及其對(duì)膽管細(xì)胞凋亡影響，探討其中可能存在的保護(hù)機(jī)制。
　　研究方法:(1)肝臟缺血再灌注模型的建立及脂聯(lián)素的表達(dá)。建立70％缺血再灌注模型，將36只SD大鼠隨機(jī)分為3組:空白組、缺血再灌注

2、組、脂聯(lián)素處理組，每組12只。術(shù)后3、6、12、24h采取血清測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)和總膽紅素(TBIL)濃度，并對(duì)膽道組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查并進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)分(BDISS)。(2)脂聯(lián)素對(duì)缺血再灌注誘導(dǎo)的膽道損傷細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用。采用ELISA法分別測(cè)定血液中IL-6濃度及TNF-α濃度;PCR法測(cè)膽管組織IL-10及TNF-α mRNA。(3)脂聯(lián)素對(duì)缺血再灌注誘導(dǎo)的膽道損傷細(xì)胞凋亡的影響。TUNEL

3、法測(cè)定各組膽管細(xì)胞凋亡情況;Western blot法檢測(cè)各組Caspase-3蛋白含量;免疫組化檢測(cè)Fas蛋白表達(dá)情況。1
　　研究結(jié)果:(1)缺血再灌注加重膽道損傷，膽管組織病理學(xué)評(píng)分和血清ALT、ALP、TBIL顯示各組間有顯著性差異(P＜0.05)。脂聯(lián)素處理組明顯改善膽道損傷，空白組、缺血再灌注組、脂聯(lián)素處理組病理組織學(xué)評(píng)分分別為0、8.34±1.16、4.67±1.52，各組比較均有差異(P＜0.05)。(2)缺血再灌

4、注組血清IL-6和TNF-α水平明顯高于空白組，并且與脂聯(lián)素組相比有明顯差異(P＜0.05)。脂聯(lián)素組炎癥因子IL-6及TNF-α均低于缺血再灌注組。脂聯(lián)素組膽道組織TNF-α mRNA下降，IL-10 mRNA增高，差異有顯著性(P＜0.05)。(3) TUNEL實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素組膽管細(xì)胞凋亡明顯減少?？瞻捉M，缺血再灌注組和脂聯(lián)素處理組Caspase-3相對(duì)蛋白表達(dá)水平分別為8.11±1.44，73.26±7.21，42.48±3.37