β-廣藿香烯抗炎作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　廣藿香，別名刺蕊草，來源于唇形科刺蕊草屬植物廣藿香Pogostemon cablin(Blanco) Benth.的干燥地上部分，常用于各種炎癥疾病的治療。本課題組前期已經(jīng)對廣藿香油和廣藿香油中廣藿香醇和廣藿香酮兩個藥效成分進行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)不管在動物模型還是細胞模型中，它們均能表現(xiàn)出顯著的抗炎活性。β-廣藿香烯是廣藿香油中含量較多的另一種倍半萜類成分，分子式為C15H24，由于獲取較難，所以其藥效作用一直未被報道

2、。同時，β-廣藿香烯也是薁類化合物的一種，具有典型的5元環(huán)與7元環(huán)駢合而成的芳香骨架，薁類化合物具有良好的抗炎和抗氧化等活性?；谝陨蟽牲c，β-廣藿香烯是否也具有一定的抗炎活性呢？故本文擬從抗炎角度，評價其活性及可能的作用機制。
　　方法:
　　1.β-廣藿香烯抗非感染性炎癥作用研究
　　建立一種有效的方法從廣藿香油中提取β-廣藿香烯，并對其進行初步急性毒性研究。構(gòu)建體內(nèi)抗非感染性炎癥小鼠模型:二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹模

3、型、醋酸誘導(dǎo)小鼠毛細血管通透性增加模型和角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠足腫脹模型，測定β-廣藿香烯(10，20和40 mg/kg)對小鼠耳廓腫脹度、腹腔毛細血管通透性和足趾腫脹度的影響，觀察足跖病理形態(tài)的變化，測定足跖組織中丙二醇MDA和過氧化物酶MPO的活性，以及炎癥介質(zhì)TNF-α，IL-1β，IL-6，NO和PGE2的含量，Western blot測定iNOS、COX-2和NF-κB的蛋白表達水平。
　　2.β-廣藿香烯抗感染性炎癥作用研究

4、
　　構(gòu)建感染性炎癥動物模型（LPS誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷模型），測定β-廣藿香烯(2.5，5.0和10.0 mg/kg)對LPS誘導(dǎo)急性肺損傷小鼠生存情況的影響并選取最優(yōu)劑量進行機制研究。復(fù)制氣管滴注小鼠急性肺損傷模型，觀察肺部組織病理形態(tài)變化，測定肺濕/干重比、MDA和MPO的活性，ELISA測定肺泡灌洗液中TNF-α，IL-1β，IL-6的含量;Westem blot測定肺組織中Nrf2與NF-κB信號通路關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Nrf2、

5、HO-1、IκB、NF-κBp65的蛋白表達水平及其下游調(diào)控基因NQO1，GCLC，HO-1 mRNA和TNF-α，IL-1β，IL-6 mRNA的表達。
　　結(jié)果:
　　1.β-廣藿香烯抗抗非感染性炎癥的研究
　　采用精餾-柱層析結(jié)合法從廣藿香油中分離得到純度大于98％的β-廣藿香烯，急性毒性結(jié)果顯示β-廣藿香烯LD50大于10 g/kg，基本無毒性。同時，結(jié)果顯示，β-廣藿香烯可以抑制二甲苯致耳廓腫脹和角叉菜膠致小

6、鼠足腫脹程度，抑制醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的增加，減少足跖組織病理形態(tài)的改變，降低足跖組織中MDA和MPO活性。同時，β-廣藿香烯抑制角叉菜膠致小鼠足腫脹組織中炎癥介質(zhì)TNF-α，IL-1β，IL-6，NO和PGE2的釋放，下調(diào)iNOS和COX-2的蛋白表達。進一步的研究結(jié)果表明，β-廣藿香烯可以抑制肺組織中IκB的磷酸化水平，抑制細胞漿內(nèi)p65轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)移到細胞核中。
　　2.β-廣藿香烯抗感染性炎癥作用研究
　　β-

7、廣藿香烯給藥后，可以顯著提高LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠的生存率，減輕肺組織的損傷程度和水腫情況，抑制LPS誘導(dǎo)肺組織中MDA及MPO水平的升高，降低肺泡灌洗液中TNF-α，IL-1β，IL-6的含量，上調(diào)Nrf2及其下游抗氧化基因NQO1、GCLC和HO-1 mRNA的蛋白表達，下調(diào)NF-κB及其下游抗炎基因TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的蛋白表達。
　　結(jié)論:
　　首次從廣藿香油中提取得到β-廣藿香烯，并證實其