沙苑子黃酮抗輻射作用及作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究沙苑子黃酮(Flavonoids of Astragalus complanatus，F(xiàn)AC)抗輻射損傷的作用及作用機(jī)制。 方法：①本實(shí)驗(yàn)建立60Coγ射線小鼠損傷模型，觀察FAC對(duì)輻射小鼠生存的保護(hù)作用，計(jì)算生存率；測(cè)定脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)和外周血象；用MTT方法進(jìn)行ConA及LPS誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)；蘇木素伊紅染色(hematoxylin and eosin，HE)切片觀察FAC對(duì)輻射造成損傷的保護(hù)作用。②采用H

2、2O2／Fe2+體系通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，鄰苯三酚自氧化系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基；采用分光光度法觀察FAC清除超氧陰離子自由基、羥基自由基和DPPH自由基的清除率及抑制線粒體腫脹和抑制紅細(xì)胞溶血的作用；組織勻漿法檢測(cè)輻射小鼠肝臟中的超氧化物歧化酶(SOD)、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的含量和總抗氧化能力(T-AOC)的活力；Western Blot法觀察FAC對(duì)輻射小鼠肝臟中的核因子信

3、號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響。③吉姆薩染色法觀察輻射小鼠骨髓微核率的變化；利用吸光度測(cè)量輻射小鼠骨髓DNA含量的變化，觀察FAC對(duì)受損細(xì)胞核的影響；通過單細(xì)胞凝膠電泳觀察FAC對(duì)H2O2氧化損傷的大鼠肝細(xì)胞株BRL中DNA鏈的保護(hù)作用。 結(jié)果：①FAC提高受輻射小鼠21 d存活率到100％，延長(zhǎng)受輻射小鼠的存活時(shí)間；升高輻射小鼠外周血中的白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、血小板數(shù)和血紅蛋白數(shù)； FAC給藥組小鼠的T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖能力高于模型組

4、的增殖能力；FAC給藥組的小鼠脾臟和胸腺指數(shù)對(duì)比模型組顯著增加，免疫器官的損傷降低；HE切片結(jié)果顯示輻射后肝細(xì)胞失去正常的索狀結(jié)構(gòu)。肝細(xì)胞腫脹，發(fā)生脂肪變性，嚴(yán)重者肝細(xì)胞出現(xiàn)壞死，壞死的細(xì)胞核濃縮、碎裂、溶解，淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。FAC治療組肝細(xì)胞的索狀結(jié)構(gòu)清楚，肝竇較正常，肝細(xì)胞呈輕微的顆粒變性，細(xì)胞壞死程度不明顯。②FAC能顯著升高SOD和GSH-Px的含量，可以抑制MDA的含量，恢復(fù)機(jī)體的總抗氧化能力：FAC的超氧陰離子自由

5、基、羥基自由基的清除率達(dá)到60％以上，對(duì)DPPH自由基的清除率為90％；對(duì)線粒體腫脹和紅細(xì)胞溶血的抑制率均達(dá)到50％以上；Western Blot結(jié)果顯示FAC可提高受輻射小鼠肝臟中NF-KB抑制蛋白I κ B-α的蛋白表達(dá)水平，降低NF-κ B蛋白家族成員p65的蛋白表達(dá)水平，提示FAC使氧自由基激活的核因子通路受阻。③FAC顯著降低受輻射損傷小鼠的骨髓微核率，提高DNA含量，單細(xì)胞凝膠電泳顯示FAC給藥后受損的BRL細(xì)胞的彗尾狀DN