susA、galE和lgtC基因轉入煙草及轉基因植株糖分分析.pdf

1、—— 坐塞查蘭堡主蘭堡墼 Y ! ! ! ! ! !分類號：密級：單位代碼：1 0 4 2 2學 號：2 0 0 3 1 1 4 1 10 ▲芰歲。暑碩士學位論文論文題目：s u s A 、g a l E 和t g t c 基因轉入煙草及轉基因植株糖分分析作者姓名張艷芳專 業(yè)細胞生物學指導教師姓名楊愛芳專業(yè)技術職務副教授2 0 0 6 年4 月2 0 日山東大學碩士學位論文摘要植物作為生物反應器具有許多微生物、動物細胞培養(yǎng)系統(tǒng)所不具備的

2、優(yōu)點：1 ) 可對真核蛋白進行正確的翻譯后加工，形成有活性的分子；2 ) 不需要復雜的發(fā)酵產物后提取和分離、純化過程：3 ) 可利用自身豐富的底物，生產成本相對低廉；4 ) 不涉及公眾目前非常關心的有關轉基因動物倫理道德的問題和產品病毒污染等問題。因此，轉基因植物將成為一種新的潛力巨大的生物反應器。迄今為止，已有大量的有關利用植物生產活性蛋白用于醫(yī)藥、食品、工業(yè)等領域的可行性文獻，也有利用植物生產高附加值碳水化合物和脂類的報導。植物通過

3、光合作用在葉中合成糖類物質，然后從葉中轉移到根、( 塊) 莖、籽粒等貯存器官中，采用遺傳改良方法改變植物組織的糖代謝途徑。有可能使植物成為生產高附加值寡糖、多糖和糖蛋白的生物反應器。G l o b o 廿i o s e 是一種具有重要價值的寡糖。在大腸桿菌中．它的合成需要3 個關鍵酶基因：1 ) s u s A ，編碼S u c r o s e s y n t h a s e ( E C 2 ．4 ．I ．1 3 ) ：2 ) g a

4、l E ．編碼U D P - g a l a c t o s e 4 - e p i m e r a s e ( E C5 ．1 _ 3 ．2 ) ；3 ) l g t C ，編碼小l ，4 - g a l a c t o s y l t r a n s f e r a s e( E C 2 ．4 ．1 ．x ) 。在植物中G l o b o t r i o s e 因缺少這三種酶而不能被合成。本工作擬將上述基因轉入模式植物煙草，探討利

5、用轉基因煙草合成G l o b o t r i o s e 的可能性。首先將上述基因分別正、反向克隆到植物表達載體p C A M B I A l 3 0 0 ．3 5 S ．T r i o s ．a ／s的印”I 位點，共得到6 個重組質粒p l g t C ( + ，．) 、p g a l E ( + 厶) 和p s u s A ( + ，．) 。用攜帶上述質粒的農桿菌轉化煙草無菌苗葉盤，在加有選擇劑的培養(yǎng)基上篩選后獲得轉化植株。對轉

6、化植株進行P C R 檢測和N o r t h e r n 雜交鑒定，證明外源基因已轉入煙草并活躍表達。對轉基因煙草植株的可溶性總糖分析發(fā)現(xiàn)，轉正義s u s A 基因的煙草植株可溶性糖含量比對照植株有一定提高，在檢測的4 個株系中，除1 個差異不顯著外，其余3 個株系均達差異顯著水平( P ≤O ．0 5 ) ：這3 個株系間可溶性糖含量雖有差異，但差異不顯著。轉反義s u s A 基因的煙草株系，其可溶性糖含量與對照株系相比，除1