Ser-Thr蛋白激酶PpkA對(duì)銅綠假單胞菌毒力及耐藥的調(diào)控作用.pdf

1、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是臨床上最常見(jiàn)的引起感染的革蘭氏陰性條件致病菌，也是一種典型的耐藥菌。磷酸化是一種重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾，是調(diào)節(jié)和控制蛋白質(zhì)功能最普遍，也是最重要的機(jī)制。近年來(lái)有研究表明Ser/Thr蛋白激酶及其引起的磷酸化修飾與細(xì)菌的毒力及耐藥性有關(guān)。本課題擬揭示P.aeruginosa的Ser/Thr蛋白激酶PpkA對(duì)其毒力及耐藥的調(diào)控作用。
　　通過(guò)比較野生型菌株P(guān).aerugin

2、osa PAO1和ppkA基因缺陷菌株△ppkA對(duì)Hela細(xì)胞的侵襲作用、植物的毒力、綠膿菌素分泌、氧化應(yīng)激和高滲環(huán)境的抵抗及生物被膜產(chǎn)量等方面的差異來(lái)研究PpkA對(duì)P.aeruginosa毒力的調(diào)控作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PpkA可增強(qiáng)P.aeruginosa毒力。
　　為探討PpkA在耐藥中的作用，首先用1/2 MIC的慶大霉素誘導(dǎo)PAO1，獲得耐藥菌PAO1-R，經(jīng)Western Blot分析，發(fā)現(xiàn)PAO1-R與PAO1相比其全菌

3、蛋白的Ser、Thr磷酸化水平和另兩種Ser/Thr蛋白激酶Stk1、PA1782表達(dá)量均上調(diào)，這提示PpkA與該菌的耐藥性相關(guān)。對(duì)多種抗生素的MIC分析結(jié)果卻顯示PAO1和△ppkA的MIC均相同，但Western Blot結(jié)果表明PAO1膜蛋白Ser、Thr蛋白磷酸化水平均明顯高于△ppkA；同時(shí)，與PAO1相比，Stk1和PA1782在△ppkA中的表達(dá)量均上調(diào)；在頭孢他啶、慶大霉素次抑菌濃度（1/4MIC、1/2MIC）的誘導(dǎo)下