青藏高原土壤鏈霉菌的分離鑒定及其抗菌活性研究.pdf

1、青藏高原是極端環(huán)境的一個(gè)代表,對(duì)其土壤微生物的研究多為細(xì)菌多樣性及其分布的研究,而對(duì)土壤中鏈霉菌多樣性及其功能代謝方面的研究相對(duì)較少。鑒于多重耐藥菌的不斷增多以及發(fā)現(xiàn)新抗菌物質(zhì)的幾率減少,開(kāi)展對(duì)青藏高原土壤中鏈霉菌資源的研究不僅有望發(fā)現(xiàn)具有廣譜抗性的鏈霉菌新種,而且對(duì)其不同區(qū)域鏈霉菌的分布情況及其資源開(kāi)發(fā)利用具有重要的理論和實(shí)踐價(jià)值。本研究以青藏高原當(dāng)雄、五道梁、北麓河和通天河等地區(qū)的土壤樣品為材料,利用分離培養(yǎng)方法和分子生物學(xué)技術(shù),對(duì)

2、土壤鏈霉菌資源進(jìn)行分離鑒定,同時(shí)對(duì)所分離的菌株進(jìn)行了革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌的抗菌活性研究。主要研究結(jié)果如下:
　　1.青藏高原土壤中存在豐富的鏈霉菌資源。從11個(gè)樣點(diǎn)的土壤樣品中共分離得到150株鏈霉菌,其中30℃下分離得到144株,4℃下分離得到6株。當(dāng)雄、五道梁Ⅰ、北麓河、雁石坪、開(kāi)心嶺、烏麗、安多、唐古拉山、五道梁Ⅱ、通天河和沱沱河地區(qū)分離的鏈霉菌數(shù)分別占分離總數(shù)的3.33％、7.33%、2%、2%、2%、20.67%、4.6

3、7%、1.33%、18.67%、16.67%和21.33%。4℃下分離的6株鏈霉菌分別來(lái)自五道梁Ⅰ、開(kāi)心嶺、烏麗、五道梁Ⅱ和通天河地區(qū)。
　　2.對(duì)菌株的16S rRNA基因進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序,序列比對(duì)結(jié)果表明,分離所得的菌株和數(shù)據(jù)庫(kù)中已登錄鏈霉菌的同源性很高,其序列相似性在99%~100%之間,有個(gè)別菌株的同源性較低,菌株WDL-DM-5的相似性為90.76%,菌株TTH-DM-1的相似性為95%。
　　3.遺傳多樣性分析表明

4、,其中S. avidinii、S. spororaveus、S. vinaceus、S. cirratus、S. albidochromogenes、S. flavidovirens和S. candidus為青藏高原土壤中的優(yōu)勢(shì)鏈霉菌,分別占測(cè)序菌株的11.76%、10.29%、7.35%、13.24%、10.29%、5.88%和8.82%。S. mirabilis和S. cellostaticus只在當(dāng)雄地區(qū)土壤中出現(xiàn),S.micro

5、flavus只在北麓河地區(qū)土壤中出現(xiàn), S. finlayi只在雁石坪地區(qū)土壤中出現(xiàn),S. novaecaesareae、S. anulatus和S. scabiei只在烏麗地區(qū)土壤中出現(xiàn),S. hirsutus和S. abloniger只在五道梁Ⅱ地區(qū)土壤中出現(xiàn),S. tauritus只在通天河地區(qū)土壤中出現(xiàn),S. phaeoluteigriseus和S. turgidiscabiei只在沱沱河地區(qū)土壤中出現(xiàn),S. hypolithi

6、cus和S. clavifer只在開(kāi)心嶺地區(qū)土壤中出現(xiàn)。上述結(jié)果表明,在青藏高原不同地域的土壤中鏈霉菌的種類(lèi)具有相似性,但也存在特殊性,且其優(yōu)勢(shì)種類(lèi)所占比例較大。
　　4.抗菌活性研究表明,71株鏈霉菌對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌或陰性細(xì)菌有拮抗作用,占分離菌株總數(shù)的47.33%,其中對(duì)大腸桿菌具有抗性的菌株為55株,對(duì)金黃色葡萄球菌具有抗性的菌株為58株,對(duì)枯草芽孢桿菌具有抗性的菌株為65株。對(duì)3株指示菌均有抗性的菌株為45株,占菌株總數(shù)的