阿魏酸下調(diào)CYP2E1和抑制TLR4介導(dǎo)的炎癥減輕對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)的肝毒性.pdf

1、目的：研究阿魏酸（Ferulic acid，F(xiàn)A）對(duì)對(duì)乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）誘導(dǎo)的肝毒性的保護(hù)作用并探討其機(jī)制。
　　方法：將Balb/c小鼠隨機(jī)分成六組，分別為空白對(duì)照組、阿魏酸對(duì)照組、模型組，低、中、高劑量的阿魏酸干預(yù)組。禁食過夜的小鼠腹腔注射APAP（350mg/kg）建立急性肝損傷模型；分別給予10、30、100mg/kg的阿魏酸每隔8h一次，連續(xù)灌胃3次，然后腹腔注射APAP，作為低、中、高劑

2、量的阿魏酸干預(yù)組；以100mg/kg的阿魏酸每隔8h一次，連續(xù)灌胃3次作為阿魏酸對(duì)照組。給予APAP18 h后檢測(cè)血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）水平；肝臟組織石蠟切片蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色評(píng)價(jià)病理變化；末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP缺口末端標(biāo)記測(cè)定法（Terminal deoxyn

3、ucleoitidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）和Caspase-3活性測(cè)定評(píng)價(jià)凋亡情況；蛋白免疫印記法（western blot）和定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測(cè)肝組織中細(xì)胞色P4502E1（cytochrome P4502

4、E1，CYP2E1）的表達(dá)；谷胱甘肽（glutathione）的含量測(cè)定和過氧化氫酶（catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性檢測(cè)評(píng)價(jià)肝臟的抗氧化能力；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)血清中炎性介質(zhì)TNF-α和IL-1β的表達(dá)；Western blot分析肝臟組織中Toll樣受體4（Toll-like rec

5、eptor4，TLR4）、p-IRAK1、p-IκB、p-p38蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.阿魏酸呈劑量依賴性地降低了APAP誘導(dǎo)的ALT、AST水平。
　　2.阿魏酸減輕了APAP誘導(dǎo)的肝臟病理改變和凋亡。HE染色結(jié)果顯示阿魏酸減少了APAP導(dǎo)致的壞死和出血程度。TUNEL染色和Caspase-3活性檢測(cè)結(jié)果表明了阿魏酸預(yù)處理后的細(xì)胞凋亡程度降低。
　　3.阿魏酸顯著抑制了APAP誘導(dǎo)的CYP2E1的m

6、RNA和蛋白表達(dá)。
　　4.阿魏酸明顯抑制了APAP誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)。阿魏酸干預(yù)后，肝組織GSH的含量顯著增多，SOD、CAT的活性顯著增強(qiáng)。
　　5.阿魏酸顯著降低了APAP誘導(dǎo)的炎性因子TNF-α和IL-1β的表達(dá)。
　　6.阿魏酸下調(diào)APAP誘導(dǎo)的TLR4、p-IRAK1、p-IκB、p-p38蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論：阿魏酸能減輕APAP誘導(dǎo)的肝毒性，這種保護(hù)作用可能與下調(diào)CYP2E1表達(dá)，負(fù)性調(diào)控TLR4