11βHSD1通過限制有氧糖酵解抑制肝細胞癌生長與轉移.pdf

1、目的：觀察11βHSD1和11βHSD2在人HCC標本組織（Hepatocellular carcinoma tissue，HCT）及配對的癌旁無瘤標本組織（Adjacent non-cancerous tissue，ANT）中的表達，并結合相應的隨訪資料，探討11βHSD1和11βHSD2的表達與HCC患者臨床病理因素以及預后的相關性。
　　方法：隨機選取華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院肝臟外科中心2004年10月至2014年

2、5月間手術切除治療并經(jīng)組織病理學確診的310例HCC患者的HCT及相應ANT，采用免疫組織化學染色（Immunohistochemistry stainning，IHC）、蛋白免疫化學印記（Western blotting，WB）等技術，以自身為配對，結合臨床病理因素及隨訪資料分析11βHSD1和11βHSD2的表達。
　　結果：11βHSD1和11βHSD2在HCT中表達不相同，與相應的ANT相比，11βHSD1在HCT中表達水

3、平明顯下降（p＜0.001）；11βHSD2在HCT與ANT中表達未檢測出顯著差異。結合臨床病理及隨訪資料分析結果提示，11βHSD1的表達水平與 HCC相關因素如性別、年齡、乙肝病史、丙肝病史、血吸蟲病史、吸煙史、飲酒史、糖尿病史、腫瘤結節(jié)直徑、腫瘤結節(jié)數(shù)目、門靜脈癌栓、腫瘤包膜完整性、血管浸潤、周圍侵犯、淋巴浸潤、遠處轉移、分化程度、Edmondson-Steiner分級、Child-Pugh分級、TNM分級、BCLC分級、血糖、A

4、LT、AST、總膽紅素、直接膽紅素、γ-GT、ALP、ALB、膽固醇、PT、AFP、CEA、CA199、ICG和循環(huán)腫瘤細胞數(shù)目（CTC）等的相關性統(tǒng)計學分析顯示，11βHSD1在HCT中表達水平與腫瘤結節(jié)直徑、腫瘤結節(jié)數(shù)目、門靜脈癌栓、腫瘤包膜完整性、血管浸潤、CTC、糖尿病史、血糖、分化程度、Edmondson-Steiner分級、Child-Pugh分級、TNM分級、BCLC分級顯著相關；生存分析顯示11βHSD1低表達的HCC患

5、者具有較高的術后復發(fā)率和較低的總體生存率。
　　結論：11βHSD1在HCT中主要呈低表達，且往往提示HCC患者較差的預后。
　　目的：本文以SMMC-7721、BEL7402肝癌細胞系為研究工具，通過構建過表達和敲減11βHSD1的肝癌細胞系研究其腫瘤生物學行為的變化探討11βHSD1在肝癌進展的作用。
　　方法：利用慢病毒為工具構建過表達11βHSD1的肝癌細胞系7721 HSD11B1，利用siRNA構建敲減11

6、βHSD1的肝癌細胞系7402 siHSD11B1。Transwell細胞遷移，侵襲實驗判定腫瘤細胞的遷移、侵襲。體內利用肝癌的裸鼠門靜脈注射模型、原位種植誘導轉移模型評定11βHSD1過表達/敲減的肝癌細胞系與野生型細胞系轉移能力的差異；用CCK-8實驗、平板克隆實驗、瓊脂糖克隆實驗評判細胞細胞增殖能力的差異，腫瘤細胞裸鼠皮下成瘤模型評估腫瘤體內成瘤性差異。
　　結果：11βHSD1過表達抑制SMMC-7721體外和體內的增殖、

7、侵襲和轉移能力。7402 siHSD11B1因重度酸中毒不能存活。
　　結論：11βHSD1對腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移起抑制作用。
　　目的：研究11βHSD1是否通過葡萄糖代謝通路調控肝癌細胞的惡性生物學行為；
　　方法：Western blotting檢測腫瘤遷移和轉移相關指標，膠原酶相關的MMP1和MMP13，明膠酶相關的MMP2和MMP9，基質溶素相關的MMP3和MMP11，金屬蛋白酶相關MMP12，膜型基質

8、金屬蛋白酶MMP14和MMP17，以及其他MMP21；轉移與血管形成和擬態(tài)相關指標HIF1α、VEGF、Angptl4和COX2；細胞增殖和生長相關指標，轉錄因子c-Myc，抑癌基因Rb，細胞周期蛋白Cyclin A2、Cyclin D1、Cyclin E1，細胞周期蛋白依靠性激酶抑制劑p21Cip1和p27Kip1以及細胞周期依賴激酶CDK4和CDK2；葡萄糖攝取和糖酵解關鍵酶，GLUT1、GLUT4、HK2、GAPDH、PKM2、L

9、DHα和PDH；以及細胞能量狀態(tài)感受器AMPK的表達。CO-IP分析11βHSD1與AMPK的相互作用。
　　結果：11βHSD1能夠下調遷移和轉移相關的MMP2，MMP3，MMP9，MMP12；轉移、血管形成和擬態(tài)相關的HIF1α、VEGF、Angptl4和COX2；細胞增殖與生長相關的c-Myc，p-RbSer811，Cyclin A2、Cyclin D1、Cyclin E1、p21Cip1和CDK4；葡萄糖攝取和糖酵解關鍵酶