體外培養(yǎng)受精卵第一次卵裂的調(diào)控因素的研究.pdf

1、在人類輔助生殖技術(shù)體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）和卵胞漿內(nèi)單精子注射（intracytoplasmic sperm injection, ICSI）的過程中，有一些受精卵不能成功的進行卵裂。在少數(shù)患者中，她們的大部分受精卵都不能成功的完成第一次細胞分裂。目前，其原因和機制尚不清楚。因此，非常有必要對調(diào)控受精卵第一次細胞分裂的主要因素進行深入的研究，以期為

2、解決這個臨床問題提供理論基礎(chǔ)和新的思路和方法。
　　 第一部分 PLK1在受精卵第一次分裂過程中的動態(tài)表達
　　 目的：探討PLK1在小鼠受精卵第一次分裂過程中的動態(tài)表達及其與細胞周期的時間關(guān)系。
　　 方法：用孕馬血清對小鼠進行促排卵，48h后注射HCG，并與雄鼠同籠誘導(dǎo)體內(nèi)受精。采用Western blot方法檢測PLK1在注射HCG后16h、24h、28h、32h和36h的小鼠受精卵中的表達情況。并分析PL

3、K1在受精卵中表達的變化與受精卵第一次分裂時間進程的關(guān)系。
　　 結(jié)果：從注射HCG后16h到36h，PLK1的表達量是不斷增加的。注射HCG后32h-36h，PLK1在受精卵中的表達量達到最大，并且顯著的高于其他各組（16h、24h和28h，P=0.000）。這個時間正好與小鼠受精卵第一次分裂的M期相吻合。
　　 結(jié)論：PLK1的表達在小鼠受精卵第一次分裂的M期達到最高水平，可能在此過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。
　

4、　 第二部分 去除透明帶對體外培養(yǎng)小鼠受精卵第一次卵裂的影響
　　 目的：探討去除透明帶對體外培養(yǎng)小鼠受精卵第一次卵裂率的影響。排除去除透明帶對小鼠受精卵首次分裂的影響，為下一部分實驗奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：用孕馬血清對小鼠進行促排卵，48h后注射HCG，并與雄鼠同籠誘導(dǎo)體內(nèi)受精，取受精卵。將受精卵分為去透明帶組和不去透明帶組，體外培養(yǎng)，觀察兩組受精卵分裂為2細胞胚胎的卵裂率。
　　 結(jié)果：去透明帶組的卵裂率為

5、64.12％±1.61％，不去透明帶組的卵裂率為63.06％±1.48％。兩組之間沒有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：在體外培養(yǎng)的環(huán)境下，去除透明帶對受精卵的早期發(fā)育沒有影響。沒有透明帶的受精卵也能夠正常的進行分裂。
　　
　　 第三部分降調(diào)PLK1的表達后對小鼠受精卵第一次卵裂率的影響
　　 目的：驗證PLK1siRNA對小鼠受精卵PLK1降調(diào)的作用，建立PLK1缺乏的受精卵模型。并以

6、此為基礎(chǔ)，探討缺乏PLK1對小鼠受精卵第一次卵裂的影響。
　　 方法：采用RNA干擾（siRNA）的方法降調(diào)PLK1在小鼠受精卵中的表達，并用Western blot驗證轉(zhuǎn)染效果。實驗分為四組：PLK1siRNA、siRNA control、mock transfection和only ZP removal。轉(zhuǎn)染成功后，將缺乏PLK1的受精卵體外培養(yǎng)，統(tǒng)計第一次卵裂率。
　　 結(jié)果：PLK1siRNA組的PLK1含量顯著

7、低于其他三組（P=0.000）。PLK1siRNA組的首次卵裂率也顯著的低于其他三組（P=0.000）。
　　 結(jié)論：siRNA能夠有效的降低PLK1在小鼠受精卵中的表達。缺乏PLK1的受精卵不能成功的進行第一次卵裂，PLK1在受精卵的第一次分裂過程中發(fā)揮了重要的作用。
　　 第四部分不卵裂受精卵微管蛋白/紡錘體和核/染色體形態(tài)的觀察
　　 目的：觀察不卵裂受精卵中微管蛋白/紡錘體和核/染色體的形態(tài)，探討染色體和