PCR法進行小鼠和牛的性別鑒定.pdf

1、　　家畜胚胎的性別鑒定是胚胎移植的重要組成部分。通過移植已知性別的胚胎，可使家畜達到理想的性別比例，這在畜牧業(yè)生產(chǎn)上具有重要的意義。動物的某些生產(chǎn)性狀是受性別限制(泌乳等)或性別影響的(產(chǎn)肉、產(chǎn)毛等)，通過性別控制可以使這些性狀在更多的理想性別中獲得更大的經(jīng)濟效益，加快優(yōu)良母畜的繁殖速度，促進高效畜牧業(yè)的發(fā)展。如在養(yǎng)牛業(yè)上，結(jié)合胚胎分割、胚胎冷凍保存等動物繁殖技術(shù)，可以選育優(yōu)良母牛，增加牛奶產(chǎn)量，提高肉牛產(chǎn)肉率。　　本研究以小鼠和牛為

2、研究對象，分別建立了聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)鑒定小鼠和牛性別的方法，并討論了影響PCR擴增的幾個因素。主要內(nèi)容有以下幾點：(1)依據(jù)小鼠和牛SRY基因序列，分別設(shè)計合成其巢式PCR引物；同時根據(jù)小鼠和牛ZFY-ZFX基因的序列，設(shè)計合成其各自的內(nèi)對照引物。(2)分別采集雌雄小鼠和公母牛少量組織樣品，試劑盒抽提基因組DNA，保存于TE溶液中，作為反應(yīng)模板，進行PCR擴增，其性別鑒定結(jié)果與已知性別完全一致。(3)超排處理母鼠，分別收集2-細

3、胞、4-細胞、8-細胞胚胎和早期桑椹胚，視為微量細胞樣品，熱處理后進行PCR擴增。比較常規(guī)和巢式、復合式PCR方法，并對Mg2+濃度進行梯度選擇(1.5、2.5、3.0mmol/L)，確立了合適的擴增體系及反應(yīng)條件。(4)超排處理母鼠，收集致密桑椹胚和囊胚，進行活檢。采用簡易切割法，將致密桑椹胚切為一大一小兩部分，囊胚則切取少量滋養(yǎng)層細胞。胚胎主體進行染色體分析，其鑒定結(jié)果作為性別標準。半胚或取樣細胞相應(yīng)編號，熱處理后進行PCR鑒定。(